Pipetty Pro電動移液器在蛋白質(zhì)含量測定（雙縮脲法）中的應(yīng)用

方案摘要：在雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量等需精密量取多梯度體積溶液的實(shí)驗(yàn)中，Pipetty Pro 非等量連續(xù)加樣槍可顯著提升操作效率與精度。其核心優(yōu)勢在于：支持非等量連續(xù)加樣，無需反復(fù)更換槍頭或調(diào)整參數(shù)，可一次性完成對照品 0.2-1.0mL 梯度量取及供試品靈活取樣，減少操作步驟達(dá) 60% 以上；精度高，移液誤差小，滿足實(shí)驗(yàn) “精密量取” 要求；人體工學(xué)設(shè)計(jì)降低操作疲勞。不僅有效縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，還可以降低人為誤差，為標(biāo)準(zhǔn)曲線建立及供試品測定提供穩(wěn)定可靠的移液支持，尤其適合多組平行實(shí)驗(yàn)及梯度濃度配置場景。
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
       雙縮脲試液與蛋白質(zhì)中的肽鍵反應(yīng)，生成紫色絡(luò)合物。該絡(luò)合物在 540nm 波長下的吸光度，與蛋白質(zhì)濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，可通過對照品的線性回歸方程計(jì)算供試品中蛋白質(zhì)的濃度。
 
二、‌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
① Pipetty電動移液器MSIC12-01-1000、MSIC90-001-10mL；
② 紫外-可見分光光度計(jì)；
③ 玻璃試管；
④ 計(jì)時(shí)器。
 
2、試劑和材料
① 雙縮脲試液 
② 對照品溶液 
③ 供試品溶液
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、對照品組操作
a) 使用Pipetty Pro 非等量電動移液器，在平板上提前設(shè)置好分液量，分別是 0.0mL（空白管）、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，吸取試劑，連續(xù)加至試管中。
 
b) 重復(fù)上一個(gè)移液步驟，向每支試管中加水至總體積 1.0mL，確保各管體積一致。
c) 每管分別加入雙縮脲試液 4.0mL，立即混勻，避免局部反應(yīng)不均。
d) 室溫放置 30 分鐘，保證反應(yīng)充分進(jìn)行。
e) 測定吸光度：按紫外 - 可見分光光度法，在 540nm 波長處測定各管吸光度，以 0 號空白管調(diào)零。
2、供試品組操作
a) 根據(jù)供試品預(yù)期蛋白質(zhì)濃度，使用Pipetty Pro 精密量取適量供試品溶液精密量取適量供試品溶液,使最終吸光度落在對照品吸光度范圍內(nèi)，置于具塞試管中。
b) 重復(fù)對照品組的 “定容→加試劑→混勻→室溫放置 30 分鐘” 操作。
 
c) 在相同 540nm 波長下，以 0 號空白管調(diào)零，測定供試品溶液吸光度。
 
四、結(jié)果判定
1、以對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)（X），對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)（Y），計(jì)算得到線性回歸方程（Y = aX + b）。
2、將供試品的吸光度代入線性回歸方程，反算出供試品溶液中蛋白質(zhì)的濃度。
3、將供試品溶液濃度乘以供試品的稀釋倍數(shù)，得到供試品中蛋白質(zhì)的實(shí)際含量。