Pipetty Pro電動(dòng)移液器在蛋白質(zhì)含量測(cè)定（考馬斯亮藍(lán)法）中的應(yīng)用

方案摘要：為提升試驗(yàn)效率本方案引入了 Pipetty Pro 非等量電動(dòng)移液器優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程。利用其核心非等量移液功能，可精準(zhǔn)完成對(duì)照品溶液 0.01-0.1mL 梯度體積移取，無(wú)需反復(fù)調(diào)整量程，減少操作步驟與誤差累積。該移液器 75g 輕量化設(shè)計(jì)適配長(zhǎng)時(shí)間操作，溫度自動(dòng)補(bǔ)償技術(shù)可校正手熱導(dǎo)致的體積偏差，且能精準(zhǔn)移取酸性染色液等試劑。通過(guò)提升移液準(zhǔn)確性與效率，有效優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)性，確保供試品蛋白質(zhì)濃度計(jì)算可靠，尤其適用于批量樣品的微量精準(zhǔn)測(cè)定。
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理在酸性溶液中考馬斯亮藍(lán)G250與蛋白質(zhì)分子中的堿性氨基酸（精氨酸）和芳香族氨基酸結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物，在一定范圍內(nèi)其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈正比，以蛋白質(zhì)對(duì)照品溶液作標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用比色法測(cè)定供試品中蛋白質(zhì)的含量。靈敏度高，通�？蓽y(cè)定1～200μg的蛋白質(zhì)量。
 
二、‌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
① Pipetty電動(dòng)移液器MSIC12-01-250；
② 玻璃比色皿；
③ 玻璃試管；
④ 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)。
 
2、試劑和材料
① 酸性染色液；
② 對(duì)照品溶液；
③ 供試品溶液。
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、使用Pipetty Pro非等量電動(dòng)移液器，在小程序上提前預(yù)設(shè)好每次分液的體積，一次吸取對(duì)照品溶液，依次加：0.0mL（空白管）、0.01mL、0.02mL、0.04mL、0.06mL、0.08mL、0.1mL到具塞試管內(nèi)。
 
2、所有試管均加水至 0.1mL，保證最終體積一致。
3、每管再加入酸性染色液 5.0mL，加入后需立即混勻。
4、測(cè)定波長(zhǎng)固定為595nm，立即測(cè)定吸光度。并以 0 號(hào)管作為空白對(duì)照，用于扣除背景干擾。
5、以 “對(duì)照品溶液的實(shí)際濃度” 為橫坐標(biāo)（x） ，以 “對(duì)應(yīng)測(cè)得的吸光度” 為縱坐標(biāo)（y） ，使用統(tǒng)計(jì)工具計(jì)算線性回歸方程。
注：對(duì)照品溶液的實(shí)際濃度 = 對(duì)照品原液濃度 × 取樣體積÷ 最終總?cè)莘e。
6、根據(jù)對(duì)照品溶液的濃度，使用Pipetty Pro精密量取 “適量供試品溶液”，取樣量需使測(cè)得的吸光度落在對(duì)照品線性范圍內(nèi)，重復(fù)上述 “加水定容→加染色液→測(cè)吸光度” 的操作。
 
四、結(jié)果計(jì)算
將供試品的吸光度代入線性回歸方程，計(jì)算出 “供試品溶液的測(cè)定濃度”。
最終蛋白質(zhì)含量 = 測(cè)定濃度 × 供試品的稀釋倍數(shù)