Pipetty電動(dòng)移液器在蛋白質(zhì)含量測(cè)定（福林酚法2）中的應(yīng)用

方案摘要：本方案采用福林酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，核心通過(guò)對(duì)照品建立線性關(guān)系計(jì)算供試品濃度，利用 Pipetty 電動(dòng)移液器提升實(shí)驗(yàn)精準(zhǔn)度與效率。實(shí)驗(yàn)中需精密量取去氧膽酸鈉、福林酚試液等多規(guī)格試劑，Pipetty 憑借精度高，量程廣，連續(xù)分液一致性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，確保量取誤差最小化。其獨(dú)家溫度控制功能可自動(dòng)補(bǔ)償手部熱量導(dǎo)致的分液偏差。連續(xù)分液模式大幅提升多管對(duì)照品處理效率，適配通用吸頭降低操作成本。最終通過(guò)精準(zhǔn)移液保障吸光度數(shù)據(jù)可靠，為線性回歸及含量計(jì)算提供堅(jiān)實(shí)支撐。
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
     核心原理是蛋白質(zhì)與顯色劑的特異性反應(yīng)及吸光度與濃度的線性關(guān)系。首先，去氧膽酸鈉輔助蛋白質(zhì)溶解，72% 三氯醋酸通過(guò)變性作用使蛋白質(zhì)沉淀，實(shí)現(xiàn)與雜質(zhì)分離；沉淀用試液 C 復(fù)溶后，蛋白質(zhì)肽鍵先與試液中成分反應(yīng)，再與福林酚試液（含磷鉬酸 - 磷鎢酸）作用，生成藍(lán)色復(fù)合物。該復(fù)合物在 750nm 波長(zhǎng)下的吸光度，與蛋白質(zhì)濃度呈正比。通過(guò)對(duì)照品溶液建立濃度 - 吸光度線性回歸方程，代入供試品吸光度，即可計(jì)算其濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，得到最終蛋白質(zhì)含量。
 
二、‌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
① Pipetty電動(dòng)移液器MSIC01-03-1000、MSIC90-001-10mL；
② 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)；
③ 玻璃試管；
④ 臺(tái)式離心機(jī)；
⑤ 渦旋振蕩器。
 
2、試劑和材料
① 蛋白質(zhì)對(duì)照品溶液；
② 福林酚試液；
③ 試液C；
④ 去氧膽酸鈉試液；
⑤ 72% 三氯醋酸溶液；
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、使用Pipetty電動(dòng)移液器，精密量取各濃度對(duì)照品溶液 1.0mL，分別移入玻璃試管中。
 
2、設(shè)置連續(xù)分液模式，每管加入去氧膽酸鈉試液 0.1mL，渦旋混勻后，室溫放置 10 分鐘。
 
3、加入72% 三氯醋酸溶液 0.1mL，渦旋混勻，在3000g 條件下離心 30 分鐘。
4、輕輕倒出上清液，用吸管徹底移除剩余液體，保留蛋白質(zhì)沉淀。
5、向沉淀中加入試液 C 1mL復(fù)溶，溶解后再加入試液 C 5mL，混勻，室溫放置 10 分鐘。
6、加入福林酚試液 0.5mL，立即混勻，室溫放置 30 分鐘。
7、照紫外 - 可見(jiàn)分光光度法，在750nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，同時(shí)以 “0 號(hào)管”（不含對(duì)照品的空白體系）作為空白校正。
8、以對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)（X）、對(duì)應(yīng)吸光度為縱坐標(biāo)（Y），計(jì)算線性回歸方程（Y = aX + b）。　　
 
四、結(jié)果判定
1、精密量取供試品溶液 1.0mL，完全重復(fù)上述對(duì)照品的步驟 ，測(cè)定其吸光度。
2、將供試品吸光度代入對(duì)照品的線性回歸方程，計(jì)算出供試品溶液中的蛋白質(zhì)濃度。
3、用計(jì)算得到的濃度乘以供試品的稀釋倍數(shù)，即為供試品中蛋白質(zhì)的實(shí)際含量。