OCT包埋劑的作用原理、使用方法及應(yīng)用
實驗臺上，那塊小小的組織如何在冷凍后能被切成薄如蟬翼的切片？答案就藏在一種名為OCT包埋劑的水溶性混合物中。
在免疫組化實驗室中，研究人員通常會將組織樣本平放于包埋盒內(nèi)，加入適量OCT包埋劑浸沒組織，隨后將包埋盒緩慢平放入盛有液氮的容器內(nèi)。
當包埋盒底部接觸液氮開始氣化沸騰，保持原位大約10-20秒鐘，組織即迅速凍結(jié)，隨后便可用于冰凍切片。這一過程依賴于OCT包埋劑的支撐，使柔軟的組織能夠變成適合切片的堅硬塊狀結(jié)構(gòu)。
定義：什么是OCT包埋劑？OCT包埋劑，英文全稱為Optimal Cutting Temperature compound（最優(yōu)切割溫度化合物），是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物。又稱為OCT冰凍切片包埋劑。
它已在免疫組化實驗室中廣泛應(yīng)用，主要作用是在冰凍切片時支撐組織，以增加組織的連續(xù)性，減少皺折及碎裂。
OCT包埋劑為水溶性，在漂片時可溶于水，因此在后續(xù)的染色中不會增加背景染色。利用OCT混合物預先浸潤組織，然后再進行恒冷箱切片，能夠顯著改善切片質(zhì)量。從物理特性來看，OCT包埋劑具有適當?shù)恼吵矶�，使組織與樣品托有很強的黏附性。它在溶劑還未凍結(jié)時，仍為液體的情況下，可以適當移動標本，調(diào)整組織的固定方向。
核心功能：OCT包埋劑的作用原理OCT包埋劑的核心功能是在冰凍切片時支撐組織。通過增加組織的連續(xù)性，它能有效減少皺折和碎裂，提高切片質(zhì)量。
在切片過程中，OCT包埋劑使組織柔軟易切，保持組織原有的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，這對于后續(xù)的觀察和分析至關(guān)重要。由于其水溶性特性，在漂片時可完全溶于水，不會在樣品和載玻片上留下殘留物。這一特性避免了在后續(xù)染色實驗中增加背景染色，確保了實驗結(jié)果的準確性。
OCT包埋劑還能快速冷凍組織樣本，使晶體形成的傷害最小化，從而保持樣本的原始形態(tài)和結(jié)構(gòu)，便于直接觀察細胞和組織的形態(tài)學特征。
實踐應(yīng)用：OCT包埋劑的使用方法1）標準包埋流程
根據(jù)上海交通大學醫(yī)學院的實驗動物飼養(yǎng)與管理指南，OCT包埋劑的標準包埋流程包括三個主要步驟。
1. 將放在蔗糖溶液中的組織塊取出，放入20g L-1蔗糖與OCT包埋劑1：1體積比例混合液中，室溫浸泡2小時。
2. 移入OCT包埋劑中室溫浸泡4小時，更換新的OCT包埋劑，再室溫浸泡6小時。
3. 將標本置于托物臺，用恒冷箱切片機切片（一般-22℃），片厚10μm，貼于預處理的載玻片上，-20℃冰箱保存。
2）快速包埋方法
Absin則提供了更為快捷的包埋方法：
1. 將組織塊平放于包埋盒內(nèi)，加入適量包埋劑浸沒組織。
2. 將包埋盒緩慢平放入盛有液氮的容器內(nèi)，當包埋盒底部接觸液氮開始氣化沸騰時，即保持原位切勿浸入液氮中。
3. 大約10-20秒鐘組織即迅速凍結(jié)，在組織凍結(jié)后，即可使用冰凍切片機進行切片。
3）使用注意事項
· 使用OCT包埋劑時，需注意滴加OCT包埋劑時要均勻，盡量避免氣泡。
· 包埋時需注意切面的位置和樣本的包埋方向。剩余OCT包埋塊可做好標記于凍存管內(nèi)-80度冷凍儲存?zhèn)溆谩?br /> · 新鮮組織應(yīng)在切除組織后的30分鐘內(nèi)進行OCT包埋制作冰凍切片。
· 對于不能及時處理的組織，可液氮速凍后-80度保存或經(jīng)固定液固定后蔗糖脫水再進行OCT包埋。
廣泛應(yīng)用：OCT包埋劑的實驗場景
OCT包埋劑最初是為冰凍切片而開發(fā)的，但它現(xiàn)在的應(yīng)用范圍已大大擴展。
1、免疫組化實驗與漿膜腔積液細胞學檢查
在免疫組化實驗中，OCT包埋劑是必不可少的材料，因為它能保持抗原性，不影響抗體結(jié)合。漿膜腔積液（胸水、腹水、心包積液等）脫落細胞學檢查是病理科診斷惡性腫瘤的最重要方法之一。近年來，巧用OCT包埋劑可溶于水的性能，嘗試將其作為漿膜腔積液離心沉淀后細胞的支架，再經(jīng)過脫水、透明、浸蠟形成細胞塊。這種方法操作簡便，既富集了細胞，提高了惡性瘤細胞陽性檢出率，同時也有利于惡性腫瘤類型的鑒別。
2、囊壁樣組織處理
在囊壁樣組織的處理中，利用OCT包埋劑進行冰凍切片能夠較好解決此類組織的切片問題。研究表明，使用OCT包埋劑對囊壁樣組織包埋后進行冰凍切片，能夠快速完成切片，保持組織結(jié)構(gòu)完整，染色清晰，診斷準確。
3、皮膚活檢標本診斷
皮膚活檢標本診斷中，使用冰凍切片直接免疫熒光法觀察切片標本上熒光抗體染色結(jié)果作為抗原的鑒定和定位，OCT包埋劑也發(fā)揮了重要作用。
OCT包埋劑的更多潛力仍在發(fā)掘中。除了傳統(tǒng)的組織切片，研究人員已開始將其巧用于漿膜腔積液細胞塊制作，通過其水溶性作為細胞支架，再經(jīng)脫水、透明、浸蠟形成細胞塊，富集細胞，提高惡性腫瘤細胞陽性檢出率。在每一個精準的診斷背后，都有這樣默默無聞的實驗支撐者。
Absin OCT包埋劑推薦| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
|---|---|---|
| abs9756 | OCT包埋劑 | 110mL |
