OCT包埋劑的作用原理、使用方法及應(yīng)用
瀏覽次數(shù):187 發(fā)布日期:2025-12-2
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實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,那塊小小的組織如何在冷凍后能被切成薄如蟬翼的切片?答案就藏在一種名為OCT包埋劑的水溶性混合物中。
在免疫組化實(shí)驗(yàn)室中,研究人員通常會(huì)將組織樣本平放于包埋盒內(nèi),加入適量OCT包埋劑浸沒(méi)組織,隨后將包埋盒緩慢平放入盛有液氮的容器內(nèi)。
當(dāng)包埋盒底部接觸液氮開(kāi)始?xì)饣序v,保持原位大約10-20秒鐘,組織即迅速凍結(jié),隨后便可用于冰凍切片。這一過(guò)程依賴(lài)于OCT包埋劑的支撐,使柔軟的組織能夠變成適合切片的堅(jiān)硬塊狀結(jié)構(gòu)。
定義:什么是OCT包埋劑?
OCT包埋劑,英文全稱(chēng)為Optimal Cutting Temperature compound(最優(yōu)切割溫度化合物),是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物。又稱(chēng)為OCT冰凍切片包埋劑。
它已在免疫組化實(shí)驗(yàn)室中廣泛應(yīng)用,主要作用是在冰凍切片時(shí)支撐組織,以增加組織的連續(xù)性,減少皺折及碎裂。
OCT包埋劑為水溶性,在漂片時(shí)可溶于水,因此在后續(xù)的染色中不會(huì)增加背景染色。利用OCT混合物預(yù)先浸潤(rùn)組織,然后再進(jìn)行恒冷箱切片,能夠顯著改善切片質(zhì)量。從物理特性來(lái)看,OCT包埋劑具有適當(dāng)?shù)恼吵矶,使組織與樣品托有很強(qiáng)的黏附性。它在溶劑還未凍結(jié)時(shí),仍為液體的情況下,可以適當(dāng)移動(dòng)標(biāo)本,調(diào)整組織的固定方向。
核心功能:OCT包埋劑的作用原理
OCT包埋劑的核心功能是在冰凍切片時(shí)支撐組織。通過(guò)增加組織的連續(xù)性,它能有效減少皺折和碎裂,提高切片質(zhì)量。
在切片過(guò)程中,OCT包埋劑使組織柔軟易切,保持組織原有的形態(tài)和結(jié)構(gòu),這對(duì)于后續(xù)的觀(guān)察和分析至關(guān)重要。由于其水溶性特性,在漂片時(shí)可完全溶于水,不會(huì)在樣品和載玻片上留下殘留物。這一特性避免了在后續(xù)染色實(shí)驗(yàn)中增加背景染色,確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
OCT包埋劑還能快速冷凍組織樣本,使晶體形成的傷害最小化,從而保持樣本的原始形態(tài)和結(jié)構(gòu),便于直接觀(guān)察細(xì)胞和組織的形態(tài)學(xué)特征。
實(shí)踐應(yīng)用:OCT包埋劑的使用方法
1)標(biāo)準(zhǔn)包埋流程
根據(jù)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)與管理指南,OCT包埋劑的標(biāo)準(zhǔn)包埋流程包括三個(gè)主要步驟。
1. 將放在蔗糖溶液中的組織塊取出,放入20g L-1蔗糖與OCT包埋劑1:1體積比例混合液中,室溫浸泡2小時(shí)。
2. 移入OCT包埋劑中室溫浸泡4小時(shí),更換新的OCT包埋劑,再室溫浸泡6小時(shí)。
3. 將標(biāo)本置于托物臺(tái),用恒冷箱切片機(jī)切片(一般-22℃),片厚10μm,貼于預(yù)處理的載玻片上,-20℃冰箱保存。
2)快速包埋方法
Absin則提供了更為快捷的包埋方法:
1. 將組織塊平放于包埋盒內(nèi),加入適量包埋劑浸沒(méi)組織。
2. 將包埋盒緩慢平放入盛有液氮的容器內(nèi),當(dāng)包埋盒底部接觸液氮開(kāi)始?xì)饣序v時(shí),即保持原位切勿浸入液氮中。
3. 大約10-20秒鐘組織即迅速凍結(jié),在組織凍結(jié)后,即可使用冰凍切片機(jī)進(jìn)行切片。
3)使用注意事項(xiàng)
· 使用OCT包埋劑時(shí),需注意滴加OCT包埋劑時(shí)要均勻,盡量避免氣泡。
· 包埋時(shí)需注意切面的位置和樣本的包埋方向。剩余OCT包埋塊可做好標(biāo)記于凍存管內(nèi)-80度冷凍儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br />
· 新鮮組織應(yīng)在切除組織后的30分鐘內(nèi)進(jìn)行OCT包埋制作冰凍切片。
· 對(duì)于不能及時(shí)處理的組織,可液氮速凍后-80度保存或經(jīng)固定液固定后蔗糖脫水再進(jìn)行OCT包埋。
廣泛應(yīng)用:OCT包埋劑的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景
OCT包埋劑最初是為冰凍切片而開(kāi)發(fā)的,但它現(xiàn)在的應(yīng)用范圍已大大擴(kuò)展。
1、免疫組化實(shí)驗(yàn)與漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查
在免疫組化實(shí)驗(yàn)中,OCT包埋劑是必不可少的材料,因?yàn)樗鼙3挚乖,不影響抗體結(jié)合。漿膜腔積液(胸水、腹水、心包積液等)脫落細(xì)胞學(xué)檢查是病理科診斷惡性腫瘤的最重要方法之一。近年來(lái),巧用OCT包埋劑可溶于水的性能,嘗試將其作為漿膜腔積液離心沉淀后細(xì)胞的支架,再經(jīng)過(guò)脫水、透明、浸蠟形成細(xì)胞塊。這種方法操作簡(jiǎn)便,既富集了細(xì)胞,提高了惡性瘤細(xì)胞陽(yáng)性檢出率,同時(shí)也有利于惡性腫瘤類(lèi)型的鑒別。
2、囊壁樣組織處理
在囊壁樣組織的處理中,利用OCT包埋劑進(jìn)行冰凍切片能夠較好解決此類(lèi)組織的切片問(wèn)題。研究表明,使用OCT包埋劑對(duì)囊壁樣組織包埋后進(jìn)行冰凍切片,能夠快速完成切片,保持組織結(jié)構(gòu)完整,染色清晰,診斷準(zhǔn)確。
3、皮膚活檢標(biāo)本診斷
皮膚活檢標(biāo)本診斷中,使用冰凍切片直接免疫熒光法觀(guān)察切片標(biāo)本上熒光抗體染色結(jié)果作為抗原的鑒定和定位,OCT包埋劑也發(fā)揮了重要作用。
OCT包埋劑的更多潛力仍在發(fā)掘中。除了傳統(tǒng)的組織切片,研究人員已開(kāi)始將其巧用于漿膜腔積液細(xì)胞塊制作,通過(guò)其水溶性作為細(xì)胞支架,再經(jīng)脫水、透明、浸蠟形成細(xì)胞塊,富集細(xì)胞,提高惡性腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性檢出率。在每一個(gè)精準(zhǔn)的診斷背后,都有這樣默默無(wú)聞的實(shí)驗(yàn)支撐者。
Absin OCT包埋劑推薦
| 貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
| abs9756 |
OCT包埋劑 |
110mL |
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