精準(zhǔn)納升分液助力實(shí)現(xiàn)噬菌體篩選的動(dòng)態(tài)檢測(cè)
瀏覽次數(shù):283 發(fā)布日期:2025-10-22
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精準(zhǔn)納升分液助力自動(dòng)化毛細(xì)管波微型生物反應(yīng)器:加速噬菌體療法的突破性平臺(tái)
抗生素濫用催生的多重耐藥菌已成為全球健康威脅,而噬菌體療法憑借對(duì)耐藥菌的精準(zhǔn)裂解能力,成為抗生素替代方案的核心方向。噬菌體篩選的關(guān)鍵環(huán)節(jié)即噬菌斑圖(phagograms)檢測(cè),主要依賴繁瑣的雙層瓊脂平板法,存在操作耗時(shí)、通量低、重復(fù)性差等問(wèn)題。現(xiàn)有商業(yè)化微型生物反應(yīng)器因體積大(≥1mL)、通量不足、塑料表面吸附噬菌體等局限,無(wú)法滿足需求。
德國(guó)布倫瑞克工業(yè)大學(xué)生化工程研究所的團(tuán)隊(duì)于2025年在《Engineering in Life Sciences》雜志發(fā)表了名為《Automation of a Capillary-Wave Microbioreactor Platform to Enhance Phage Sensitivity Screen Efficiency》的文章。在該項(xiàng)研究中,科研團(tuán)隊(duì)開發(fā)了一種自動(dòng)化毛細(xì)管波微型生物反應(yīng)器(capillary-wave microbioreactor,cwMBR)平臺(tái)。通過(guò)納升小體積的精準(zhǔn)加樣技術(shù),實(shí)現(xiàn)了噬菌體篩選的動(dòng)態(tài)檢測(cè),為噬菌體篩選提供了新的思路。
實(shí)驗(yàn)流程與結(jié)果
1. 自動(dòng)化 cwMBR 平臺(tái)搭建與核心設(shè)備集成
(1)基礎(chǔ)模塊構(gòu)建
制備含 7μL 腔室的 Foturan 玻璃芯片,裝入 3D 打印聚乳酸(PLA)支架,集成加熱膜、伺服活動(dòng)蓋(用于保濕防蒸發(fā))及振蕩混合模塊(用于快速混合)部件。
(2)安裝Biofluidix 納升級(jí)分液模塊
- 設(shè)備固定與校準(zhǔn):將2 臺(tái)德國(guó)Biofluidix的PipeJet 納升級(jí)微量分液模塊安裝于步進(jìn)電機(jī)驅(qū)動(dòng)滑臺(tái),與中間的 465nm LED光源對(duì)齊,確保分液噴頭精準(zhǔn)對(duì)準(zhǔn)芯片腔室。
- 液體配置與參數(shù)設(shè)定:將儲(chǔ)液池與Pipejet噴頭連接,在儲(chǔ)液池中分別裝入去離子水(用于補(bǔ)充蒸發(fā)的水分)和噬菌體溶液;校準(zhǔn)分液裝置至 2nL 級(jí)加樣精度,變異系數(shù) 0.37%。
(3)檢測(cè)系統(tǒng)整合
搭建平行光譜光檢測(cè)器(parallelized spectrometric light detector,PSLD),通過(guò)光纖連接芯片與光譜儀,Python 軟件實(shí)時(shí)采集數(shù)據(jù);整個(gè)平臺(tái)置于恒溫恒濕腔(37℃、95% 濕度)。(圖1)
圖 1 自動(dòng)化毛細(xì)管波微型生物反應(yīng)器(cwMBR)平臺(tái)(A)Pipejet納升分液裝置與 LED 燈支架:支架上固定有2臺(tái)Pipejet納升分液裝置,每臺(tái)分液裝置均連接有作為儲(chǔ)液池的移液器吸頭(通過(guò)管路連接)。LED 燈位于兩臺(tái)分配器之間,(B)3D 打印 cwMBR 支架(含芯片、加熱膜、光屏障及伺服控制活動(dòng)蓋):該支架最多可容納 9 個(gè)線性排列的 cwMBR 芯片。(C)自動(dòng)化 cwMBR 平臺(tái)整體示意圖:3D 打印 cwMBR 支架放置于振蕩平臺(tái)上,通過(guò)垂直振蕩實(shí)現(xiàn)混合;Pipejet納升分液裝置連接至帶步進(jìn)電機(jī)的線性滑臺(tái),可在 cwMBR 芯片上方精準(zhǔn)移動(dòng)。透光強(qiáng)度的測(cè)量由平行光譜光檢測(cè)器完成,該檢測(cè)器通過(guò)光纖與 cwMBR 芯片相連。所有設(shè)備均置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),培養(yǎng)箱通過(guò)散熱器與恒溫器加熱,并通過(guò)水浴中的超聲波加濕器維持濕度。
2. 平臺(tái)性能表征
- 體積穩(wěn)定性驗(yàn)證:實(shí)驗(yàn)測(cè)得蒸發(fā)率 1.84μL/h,編程控制 Biofluidix Pipejet納升分液裝置每 15min 補(bǔ) 0.46μL 水,8h 內(nèi)體積波動(dòng)<0.1μL。
- 溫度與檢測(cè)性能測(cè)試:對(duì)比傳統(tǒng)設(shè)備,cwMBR 14.9min 達(dá) 37℃,芯片間溫差<0.7℃;PSLD 傳感器與 OD 值線性相關(guān)(R²=99.91%),10 次檢測(cè)波動(dòng)<0.4%。
3. 自動(dòng)化噬菌斑圖驗(yàn)證
- 接種 6.5μL 大腸桿菌預(yù)培養(yǎng)物至芯片,孵育 1h 后,通過(guò)Pipejet納升分液裝置精準(zhǔn)添加噬菌體,形成多重感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection,MOI)=10⁻³ 和 10⁻⁵兩組,并設(shè)無(wú)噬菌體對(duì)照組。
- 實(shí)驗(yàn)期間Pipejet納升分液裝置自動(dòng)補(bǔ)液,PSLD 實(shí)時(shí)追蹤細(xì)胞濃度,結(jié)合顯微鏡計(jì)數(shù)驗(yàn)證結(jié)果。
4. 統(tǒng)計(jì)分析
采用單樣本 t 檢驗(yàn)并驗(yàn)證體積與溫度穩(wěn)定性,單因素方差分析比較設(shè)備差異(α=0.05)。
研究核心結(jié)論
- 成功構(gòu)建高性價(jià)比自動(dòng)化平臺(tái):整合 Biofluidix Pipejet納升分液裝置與 cwMBR,實(shí)現(xiàn) 9 組平行 7μL 反應(yīng)的自動(dòng)化操控,解決傳統(tǒng)設(shè)備體積大、平行化不足的痛點(diǎn)。
- 關(guān)鍵性能領(lǐng)跑行業(yè):Pipejet分液裝置實(shí)現(xiàn) 2nL 級(jí)精準(zhǔn)加樣,體積波動(dòng)僅 0.88%;加熱效率與溫度均一性顯著優(yōu)于 96 孔板,檢測(cè)系統(tǒng)重復(fù)性極高。
- 噬菌體篩選效率倍增:4h 內(nèi)即可獲得大腸桿菌裂解動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù),較傳統(tǒng)平板法大幅提速,且減少 90% 以上手動(dòng)操作,清晰區(qū)分不同 MOI 的裂解差異。
實(shí)驗(yàn)表明,該平臺(tái)以親水防吸附、納升級(jí)精準(zhǔn)、實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)三大優(yōu)勢(shì),為噬菌體療法高通量篩選提供核心工具,未來(lái)可拓展至噬菌體雞尾酒、藥-菌聯(lián)合療法研究,加速耐藥菌感染救治進(jìn)程。
更多資訊請(qǐng)參考原文:https://doi.org/10.1002/elsc.70021
Biofluidix是全球領(lǐng)先的研發(fā)制造高精度生物芯片點(diǎn)樣和分液系統(tǒng)的生產(chǎn)廠家,不僅有自動(dòng)化點(diǎn)樣分液平臺(tái),也提供模塊化的皮升/納升/微升(pl/nl/μl)分液裝置,能夠兼容第三方設(shè)備,實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)點(diǎn)樣和分液。廣泛應(yīng)用與生物、材料、航空、航天等多個(gè)領(lǐng)域。
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