RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀在生活飲用水大腸埃希氏菌檢測中的應(yīng)用

 方案摘要：本方案旨在將RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀應(yīng)用于生活飲用水大腸埃希氏菌多管發(fā)酵法檢測流程，通過儀器實現(xiàn)EC-MUG培養(yǎng)基的自動化制備、精準分裝及一體化滅菌前處理，替代傳統(tǒng)手動操作。結(jié)合大腸埃希氏菌β-葡萄糖醛酸酶分解熒光底物的特性，優(yōu)化實驗流程，提升檢測效率、重復(fù)性及無菌保障水平，為生活飲用水大腸埃希氏菌檢測提供高效可靠的技術(shù)方案。
 
方案詳情：
一、實驗原理
       采用總大腸菌群多管發(fā)酵法初發(fā)酵陽性的培養(yǎng)物作為待檢樣本，接種至經(jīng)RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀標準化制備的EC-MUG培養(yǎng)基中。大腸埃希氏菌可產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase），該酶能特異性分解培養(yǎng)基中的熒光底物并釋放熒光產(chǎn)物。培養(yǎng)完成后，通過366nm紫外燈照射觀察熒光反應(yīng)，結(jié)合陽性管數(shù)查MPN表，實現(xiàn)生活飲用水中大腸埃希氏菌的定性及定量檢測。RAYPA儀器的標準化制備流程可保障培養(yǎng)基成分均一性，有效降低底物分解效率的批次差異，提升檢測準確性。
二、實驗準備
1、培養(yǎng)基和試劑
① EC-MUG培養(yǎng)基
 
2、儀器與設(shè)備
① 紫外燈：6W，波長為366nm；
② 培養(yǎng)箱；
③ 電子天平；
④ 平皿：直徑9CM；
⑤ 無菌試管：約15MM×160MM；
⑥ 錐形瓶：1000ML；
⑦ 小倒管；
⑧ 接種環(huán)；
⑨ RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀。
 
三、實驗步驟
1、根據(jù)檢測樣本量，按EC-MUG培養(yǎng)基配方計算各成分用量，用電子天平精確稱量后，加入到RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀中，溶解攪拌后，儀器自動滅菌，定量分裝至試管中。
 
2、將接種后的EC-MUG管放入已預(yù)熱至44.5℃±0.5℃的培養(yǎng)箱中，密閉培養(yǎng)24h±2h，培養(yǎng)期間避免頻繁開箱，確保溫度穩(wěn)定。
四、結(jié)果報告
1、培養(yǎng)結(jié)束后，取出EC-MUG管，在暗室或遮光條件下用366nm紫外燈照射試管側(cè)壁，觀察是否產(chǎn)生藍色熒光。若試管內(nèi)出現(xiàn)明顯藍色熒光，判定為EC-MUG陽性，表明水樣中含有大腸埃希氏菌；無藍色熒光則為陰性。
2、統(tǒng)計所有檢測樣本中EC-MUG陽性的試管數(shù)量，根據(jù)多管發(fā)酵法對應(yīng)的樣本接種量及稀釋梯度，查閱大腸埃希氏菌MPN表，計算得出水樣中大腸埃希氏菌的MPN值，檢測結(jié)果以“MPN/100mL”為單位進行報告。
3、每批次實驗需同時設(shè)置陽性對照和陰性對照，陽性對照應(yīng)出現(xiàn)藍色熒光，陰性對照無熒光，否則實驗結(jié)果無效，需重新進行檢測。