對(duì)人源iPS誘導(dǎo)衍生的心肌細(xì)胞解凍效率研究

細(xì)胞解凍是生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的關(guān)鍵步驟。確保冷凍細(xì)胞溫和解凍對(duì)于保持其活力和功能至關(guān)重要。

細(xì)胞的冷凍和解凍過(guò)程都會(huì)直接影響細(xì)胞復(fù)蘇后的回收率和細(xì)胞活力，這是細(xì)胞培養(yǎng)中兩個(gè)重要的質(zhì)量方面。無(wú)論處理原代細(xì)胞、細(xì)胞系還是干細(xì)胞，遵循正確的步驟以確保解凍成功都是至關(guān)重要的。

隨著細(xì)胞治療與相關(guān)醫(yī)療技術(shù)的開(kāi)發(fā)，大規(guī)模的細(xì)胞過(guò)程處理操作是必不可少的。然而，更多研究表明大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)與相關(guān)凍存操作需格外注意，然而，同源自體細(xì)胞，它不能直接用于治療，而需要誘導(dǎo)培養(yǎng)操作。因此，由捐贈(zèng)者提供的細(xì)胞同源異體細(xì)胞（ES細(xì)胞、iPS細(xì)胞）受到了更廣泛的關(guān)注。通過(guò)從捐贈(zèng)者身上預(yù)先收集并擴(kuò)增培養(yǎng)細(xì)胞，這些細(xì)胞就能更快地用于治療。與此同時(shí)，我們用CryoMACS凍存袋和ThawSTAR CB進(jìn)行相關(guān)測(cè)試。

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)：

▶ [細(xì)胞來(lái)源] 無(wú)差別的人源iPS細(xì)胞

▶ [分裝體積] 70mL細(xì)胞懸液

▶ [細(xì)胞密度] 5x106 個(gè)/mL

▶[凍存液] STEM-CELLBANER®

▶[凍存時(shí)間] 大約1.5個(gè)月

▶[凍存袋] CryoMACS Freezing Bag 250mL

測(cè)試結(jié)果:

▶ [解凍時(shí)間] 30min.(47個(gè)2mL凍存管解凍時(shí)間共計(jì)90min)

▶[解凍活率] 95.5%

▶[解凍后細(xì)胞傳代擴(kuò)增] 原代細(xì)胞0.1x106個(gè)細(xì)胞，培養(yǎng)4天

250mL凍存袋傳代2.55次，標(biāo)定凍存管：2.49次，47個(gè)2mL凍存管：1.85次

●結(jié)論：通過(guò)細(xì)胞凍存袋實(shí)現(xiàn)大劑量的細(xì)胞冷凍與解凍，提高了工作效率，減少了細(xì)胞凋亡的風(fēng)險(xiǎn)。

實(shí)驗(yàn)：在本次實(shí)驗(yàn)中，我們兩次冷凍、與解凍細(xì)胞，這些細(xì)胞來(lái)自人源iPS誘導(dǎo)培養(yǎng)。

▶ [細(xì)胞來(lái)源] 心肌細(xì)胞來(lái)源于人源iPS細(xì)胞，這些細(xì)胞在15~17天誘導(dǎo)分化后被收集。

▶ [分裝體積] 20mL細(xì)胞懸液

▶ [細(xì)胞密度] 5x106 個(gè)/mL

▶[凍存時(shí)間] 在-150℃條件下1~2周

▶[凍存袋] CryoMACS Freezing Bag 50mL （50mL的凍存袋相當(dāng)于14個(gè)2mL的凍存管細(xì)胞裝量，細(xì)胞懸液總體積21mL）

工作時(shí)間和解凍后活率

*14個(gè)凍存管（總液體體積:21mL）按照以上步驟，累計(jì)用時(shí)超過(guò)1小時(shí)，活率94%

*50mL凍存袋（液體總量:20mL）第一次測(cè)試，累計(jì)用時(shí)20分鐘左右，活率91%

*50mL凍存袋（液體總量:20mL）第二次測(cè)試，累計(jì)用時(shí)20分鐘左右，活率91.5%

▶培養(yǎng)后評(píng)估：

解凍后進(jìn)行貼壁培養(yǎng)

結(jié)論：50mL袋裝細(xì)胞的貼壁情況與14個(gè)凍存管的細(xì)胞相當(dāng)。

通過(guò)索尼SI8000流式細(xì)胞分析：在解凍后進(jìn)行的6天貼壁培養(yǎng)之后數(shù)據(jù)如下：