對人源iPS誘導(dǎo)衍生的心肌細(xì)胞解凍效率研究

細(xì)胞解凍是生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的關(guān)鍵步驟。確保冷凍細(xì)胞溫和解凍對于保持其活力和功能至關(guān)重要。

細(xì)胞的冷凍和解凍過程都會直接影響細(xì)胞復(fù)蘇后的回收率和細(xì)胞活力，這是細(xì)胞培養(yǎng)中兩個重要的質(zhì)量方面。無論處理原代細(xì)胞、細(xì)胞系還是干細(xì)胞，遵循正確的步驟以確保解凍成功都是至關(guān)重要的。

隨著細(xì)胞治療與相關(guān)醫(yī)療技術(shù)的開發(fā)，大規(guī)模的細(xì)胞過程處理操作是必不可少的。然而，更多研究表明大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)與相關(guān)凍存操作需格外注意，然而，同源自體細(xì)胞，它不能直接用于治療，而需要誘導(dǎo)培養(yǎng)操作。因此，由捐贈者提供的細(xì)胞同源異體細(xì)胞（ES細(xì)胞、iPS細(xì)胞）受到了更廣泛的關(guān)注。通過從捐贈者身上預(yù)先收集并擴(kuò)增培養(yǎng)細(xì)胞，這些細(xì)胞就能更快地用于治療。與此同時，我們用CryoMACS凍存袋和ThawSTAR CB進(jìn)行相關(guān)測試。

準(zhǔn)備實驗：

▶ [細(xì)胞來源] 無差別的人源iPS細(xì)胞

▶ [分裝體積] 70mL細(xì)胞懸液

▶ [細(xì)胞密度] 5x106 個/mL

▶[凍存液] STEM-CELLBANER®

▶[凍存時間] 大約1.5個月

▶[凍存袋] CryoMACS Freezing Bag 250mL

測試結(jié)果:

▶ [解凍時間] 30min.(47個2mL凍存管解凍時間共計90min)

▶[解凍活率] 95.5%

▶[解凍后細(xì)胞傳代擴(kuò)增] 原代細(xì)胞0.1x106個細(xì)胞，培養(yǎng)4天

250mL凍存袋傳代2.55次，標(biāo)定凍存管：2.49次，47個2mL凍存管：1.85次

●結(jié)論：通過細(xì)胞凍存袋實現(xiàn)大劑量的細(xì)胞冷凍與解凍，提高了工作效率，減少了細(xì)胞凋亡的風(fēng)險。

實驗：在本次實驗中，我們兩次冷凍、與解凍細(xì)胞，這些細(xì)胞來自人源iPS誘導(dǎo)培養(yǎng)。

▶ [細(xì)胞來源] 心肌細(xì)胞來源于人源iPS細(xì)胞，這些細(xì)胞在15~17天誘導(dǎo)分化后被收集。

▶ [分裝體積] 20mL細(xì)胞懸液

▶ [細(xì)胞密度] 5x106 個/mL

▶[凍存時間] 在-150℃條件下1~2周

▶[凍存袋] CryoMACS Freezing Bag 50mL （50mL的凍存袋相當(dāng)于14個2mL的凍存管細(xì)胞裝量，細(xì)胞懸液總體積21mL）

工作時間和解凍后活率

*14個凍存管（總液體體積:21mL）按照以上步驟，累計用時超過1小時，活率94%

*50mL凍存袋（液體總量:20mL）第一次測試，累計用時20分鐘左右，活率91%

*50mL凍存袋（液體總量:20mL）第二次測試，累計用時20分鐘左右，活率91.5%

▶培養(yǎng)后評估：

解凍后進(jìn)行貼壁培養(yǎng)

結(jié)論：50mL袋裝細(xì)胞的貼壁情況與14個凍存管的細(xì)胞相當(dāng)。

通過索尼SI8000流式細(xì)胞分析：在解凍后進(jìn)行的6天貼壁培養(yǎng)之后數(shù)據(jù)如下：