HTRF/Alpha均相檢測(cè)技術(shù)在GPCR靶向神經(jīng)藥物研發(fā)中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)

大腦中，神經(jīng)元通過(guò)信號(hào)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行溝通，G 蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）是關(guān)鍵 “信號(hào)開關(guān)”。它們位于細(xì)胞膜上，接收外來(lái)信號(hào)并觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)，調(diào)控認(rèn)知、情緒等多種生理功能。GPCR 功能異常會(huì)導(dǎo)致大腦功能紊亂，引發(fā)帕金森病、抑郁癥等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

因此，GPCR 已成為神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物研發(fā)中最大、最成功的靶點(diǎn)家族。

在這場(chǎng)瞄準(zhǔn)GPCR 的攻堅(jiān)戰(zhàn)中，瑞孚迪（Revvity）的 HTRF 和 Alpha 均相檢測(cè)方法憑借顯著優(yōu)勢(shì)脫穎而出，成為驅(qū)動(dòng)新藥發(fā)現(xiàn)的核心引擎 —— 相較于其他檢測(cè)方法（如 WB、ELISA 等），二者無(wú)需繁瑣的洗滌步驟，大幅提升實(shí)驗(yàn)效率并減少樣本損耗，同時(shí)具備更高的特異性與靈敏度，可精準(zhǔn)捕捉低豐度信號(hào)；此外，均相體系能避免非特異性結(jié)合干擾，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性更優(yōu)。

01為何GPCR是神經(jīng)系統(tǒng)疾病明星靶點(diǎn)
GPCR家族龐大，有800多個(gè)成員，其中許多在大腦中有高表達(dá)。它們參與了幾乎所有的大腦生理過(guò)程：

• 多巴胺受體：調(diào)控運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)、動(dòng)機(jī)和獎(jiǎng)賞（與帕金森病、精神分裂癥相關(guān)）。
• 5-羥色胺（血清素）受體：調(diào)控情緒、睡眠和食欲（與抑郁癥、焦慮癥相關(guān)）。
• 代謝型谷氨酸受體（mGluR）：調(diào)控突觸可塑性和學(xué)習(xí)記憶（與阿爾茨海默病、精神分裂癥相關(guān)）。
• 腺苷受體：調(diào)控睡眠-覺(jué)醒周期和神經(jīng)保護(hù)（與帕金森病相關(guān)）。
• 阿片受體：調(diào)控疼痛和獎(jiǎng)賞（與疼痛、成癮相關(guān)）。

02瑞孚迪HTRF/Alpha：繪制GPCR信號(hào)路線圖黃金標(biāo)準(zhǔn)
Revvity的HTRF和Alpha技術(shù)提供了覆蓋GPCR信號(hào)的完整解決方案，使高通量的篩選成為可能。

圖一. GPCR信號(hào)通路

01 捕捉初始信號(hào)：第二信使檢測(cè)
cAMP檢測(cè)試劑盒 ：
應(yīng)用場(chǎng)景： 用于研究Gs（激活后升高cAMP）和Gi（激活后降低cAMP）偶聯(lián)的受體。

IP-One檢測(cè)試劑盒：
應(yīng)用場(chǎng)景： 用于定量Gq偶聯(lián)受體激活后產(chǎn)生的IP-One。

圖二. HTRF cAMP Gs dynamic kit 檢測(cè)原理和標(biāo)準(zhǔn)曲線

02監(jiān)控下游效應(yīng)：磷酸化檢測(cè)
應(yīng)用場(chǎng)景：GPCR的激活最終會(huì)匯聚到ERK、AKT等關(guān)鍵通路上。磷酸化ERK/ AKT檢測(cè)試劑盒可以檢測(cè)受體激活后的功能性輸出，驗(yàn)證藥物的整體效應(yīng)。（逐典消化液鏈接）

圖三. AlphaLisa PHOSPHO-ERK1/2 (THR202/TYR 204) 試劑盒檢測(cè)原理和驗(yàn)證數(shù)據(jù)

03偏向性藥理學(xué)核心——β-Arrestin招募檢測(cè)
應(yīng)用場(chǎng)景： 這是篩選偏向性配體的關(guān)鍵。利用β-Arrestin招募檢測(cè)試劑盒，研究人員可以直接觀察藥物是否會(huì)導(dǎo)致受體招募β-Arrestin。

圖四. HTRF β-arrestin 2 Recruitment試劑盒檢測(cè)原理和驗(yàn)證數(shù)據(jù)

04追蹤受體：GPCR內(nèi)吞檢測(cè)
應(yīng)用場(chǎng)景：受體內(nèi)吞是GPCR信號(hào)“脫敏”和“復(fù)位”的關(guān)鍵步驟。當(dāng)GPCR被長(zhǎng)時(shí)間或過(guò)度激活后，會(huì)通過(guò)內(nèi)吞作用從細(xì)胞膜上轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)部，從而終止其對(duì)細(xì)胞外信號(hào)的響應(yīng)。利用GPCR內(nèi)吞檢測(cè)技術(shù)，可以實(shí)時(shí)或終點(diǎn)監(jiān)測(cè)這一動(dòng)態(tài)過(guò)程，這對(duì)于評(píng)估受體功能的持久性、藥物脫敏效應(yīng)以及某些通過(guò)內(nèi)吞發(fā)揮作用的特定療法（如靶向受體降解技術(shù)）至關(guān)重要。（鏈接ADC推文）

圖五. pHSense Eu Anti-FLAG 檢測(cè)原理和驗(yàn)證數(shù)據(jù)

03結(jié)語(yǔ)：邁向更精準(zhǔn)的神經(jīng)疾病治療
從帕金森病的運(yùn)動(dòng)改善到精神分裂癥的癥狀控制，從抑郁癥的情緒調(diào)節(jié)到慢性疼痛的精準(zhǔn)鎮(zhèn)痛，以GPCR為靶點(diǎn)的藥物研發(fā)正在進(jìn)入一個(gè)全新的“精準(zhǔn)時(shí)代”。

Revvity的HTRF和Alpha技術(shù)，憑借其均相、高通量、高靈敏度的優(yōu)勢(shì)，以及覆蓋GPCR信號(hào)通路全貌的檢測(cè)能力，正作為不可或缺的核心工具，幫助全球科學(xué)家繪制出更清晰的GPCR信號(hào)“路線圖”，加速篩選出下一代更安全、更有效的“智能藥物”，為無(wú)數(shù)神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者帶來(lái)新的希望。