Opto™ CLD Pop Dyn新方案在細(xì)胞株穩(wěn)定性預(yù)測(cè)中的優(yōu)勢(shì)

您在細(xì)胞株開(kāi)發(fā)中是否遇到過(guò)這樣的困擾？
精心篩選出的高產(chǎn)克隆，在放大工藝中表現(xiàn)卻急轉(zhuǎn)直下？數(shù)月心血投入后，才發(fā)現(xiàn)所選克隆穩(wěn)定性存疑，為時(shí)已晚？這背后，往往隱藏著克隆種群內(nèi)部的動(dòng)態(tài)變化(Population Dynamics)這一“隱形殺手”。即使是一個(gè)單克隆來(lái)源的細(xì)胞群體，其中也可能存在表型各異的亞群——并且它們的相對(duì)豐度可能隨時(shí)間發(fā)生變化[1-3]，它們的此消彼長(zhǎng)，直接導(dǎo)致了生產(chǎn)力與產(chǎn)品質(zhì)量的不穩(wěn)定。

布魯克細(xì)胞分析推出的Opto™ CLD with Population Dynamics Kit，為您提供了破解這一行業(yè)痛點(diǎn)的金鑰匙。01痛點(diǎn)直擊：為何傳統(tǒng)方法“看不見(jiàn)”風(fēng)險(xiǎn)？CLD中最大的挑戰(zhàn)之一是識(shí)別那些不僅高產(chǎn)、高質(zhì)量而且穩(wěn)定的克隆——并且要足夠早地識(shí)別，以防止代價(jià)高昂的意外。大多數(shù)團(tuán)隊(duì)直到CLD項(xiàng)目進(jìn)行數(shù)月后，在克隆已被選入研究細(xì)胞庫(kù)之后，才評(píng)估穩(wěn)定性[4]。這種延遲可能導(dǎo)致重大風(fēng)險(xiǎn)，特別是對(duì)于在行業(yè)研發(fā)管線中占比日益增長(zhǎng)的復(fù)雜生物藥而言。

傳統(tǒng)的批量檢測(cè)方法得到的是整個(gè)細(xì)胞種群的平均數(shù)據(jù)，它將高產(chǎn)和低產(chǎn)亞群“混合平均”，完美掩蓋了種群內(nèi)部亞克隆漂移的早期跡象。這就好比僅憑一個(gè)班的平均分，無(wú)法判斷是否有學(xué)生正在急劇退步一樣。這種“數(shù)據(jù)平均化”導(dǎo)致團(tuán)隊(duì)直到工藝放大階段，才能發(fā)現(xiàn)克隆不穩(wěn)定的問(wèn)題，造成巨大的時(shí)間和資源浪費(fèi)。

為了解決這些盲點(diǎn)，CLD團(tuán)隊(duì)越來(lái)越需要能夠超越種群平均水平、捕捉亞克隆行為分布和動(dòng)態(tài)的工具，以便在工作流程早期做出更可靠、數(shù)據(jù)驅(qū)動(dòng)的決策。02解決方案：從“平均 snapshots”到“動(dòng)態(tài)分布”的視角升級(jí)

Beacon®平臺(tái)的精準(zhǔn)度和預(yù)測(cè)能力

Beacon®平臺(tái)憑借精心設(shè)計(jì)的微流體芯片，以及為CLD需求量身定制的專(zhuān)用硬件和模板化工作流程，應(yīng)對(duì)了這一挑戰(zhàn)。Beacon®平臺(tái)的檢測(cè)方法針對(duì)OptoSelect®芯片上的納升級(jí)灌流生物反應(yīng)器進(jìn)行了優(yōu)化——提供了適用于生產(chǎn)用CHO細(xì)胞系的精密度、重現(xiàn)性和動(dòng)態(tài)范圍。使用重組IgG標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行的內(nèi)部基準(zhǔn)測(cè)試顯示，Beacon®系統(tǒng)所使用的生產(chǎn)力檢測(cè)的變異系數(shù)（CV）低于10%。因此，Beacon®平臺(tái)提供的不是每個(gè)克隆的單一讀數(shù)，而是分布水平的視圖——洞察亞群行為：識(shí)別單峰與雙峰趨勢(shì)、長(zhǎng)尾現(xiàn)象，發(fā)現(xiàn)潛在的低產(chǎn)亞群。捕捉種群漂移的早期跡象：通過(guò)持續(xù)監(jiān)測(cè)分布變化，在平均滴度發(fā)生顯著變化前，即可預(yù)警不穩(wěn)定的趨勢(shì)。每個(gè)克隆有數(shù)百到數(shù)千個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，這使得改進(jìn)克隆排序、更早檢測(cè)不穩(wěn)定性以及與放大性能更強(qiáng)的相關(guān)性成為可能。與第一三共合作的一項(xiàng)盲法研究展示了這一能力，該研究通過(guò)亞克隆六個(gè)先前表征過(guò)的CHO克隆，并分析它們五天內(nèi)的分泌譜。Beacon®系統(tǒng)通過(guò)評(píng)估亞克隆表型的分布，準(zhǔn)確地將每個(gè)克隆分類(lèi)為穩(wěn)定、不穩(wěn)定或中間狀態(tài)，從而能夠以遠(yuǎn)少于8周克隆穩(wěn)定性研究的時(shí)間預(yù)測(cè)其結(jié)果。與平均化處理種群水平差異的傳統(tǒng)批量檢測(cè)不同，Beacon®平臺(tái)的檢測(cè)方法揭示了細(xì)微的表型變異——且不犧牲通量。在這項(xiàng)研究中，幾個(gè)克隆起始滴度相似，但它們的亞克隆生產(chǎn)力分布揭示了不穩(wěn)定的早期跡象。這些差異最終表現(xiàn)為隨時(shí)間推移平均生產(chǎn)力的變化。

圖1.與第一三共合作進(jìn)行的Population Dynamics工作流程，用于評(píng)估六個(gè)CHO克隆的穩(wěn)定性。每一行顯示亞克隆生產(chǎn)力的分布，列代表在Beacon®平臺(tái)上每周的測(cè)量結(jié)果。穩(wěn)定克隆保持一致的分布，而不穩(wěn)定克隆——例如以藍(lán)色突出顯示的克隆3——隨著時(shí)間推移，低產(chǎn)亞群競(jìng)爭(zhēng)勝過(guò)高產(chǎn)亞群而表現(xiàn)出分布變化。Beacon®的Assay Analyzer軟件使用這些數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)每個(gè)克隆的穩(wěn)定性譜。* 注意：通常只收集單周的測(cè)量數(shù)據(jù)，這項(xiàng)為期8周的研究是為了驗(yàn)證預(yù)測(cè)算法而進(jìn)行的。

全新的Population Dynamics試劑盒Opto™ CLD with Population Dynamics Kit，使用戶(hù)能夠?qū)⒌诙�個(gè)CLD工作流程集成到他們的CLD項(xiàng)目中，讓您無(wú)需承擔(dān)運(yùn)行兩個(gè)獨(dú)立工作流程的昂貴成本，而更深入地探索亞克隆行為和種群水平行為。

圖2. 主要Opto CLD工作流程和次要Population Dynamics工作流程圖。Opto CLD工作流程從轉(zhuǎn)染的細(xì)胞池開(kāi)始，然后進(jìn)行單細(xì)胞克隆以及初步的生產(chǎn)力和質(zhì)量表征。表現(xiàn)最佳的克隆以96孔板形式導(dǎo)出并放大培養(yǎng)約四周。在此期間，所選克隆的子樣本被重新引入Beacon®系統(tǒng)進(jìn)行Population Dynamics分析�；�于這些結(jié)果，用戶(hù)可以重新確定優(yōu)先級(jí)或淘汰低價(jià)值克隆，從而通過(guò)將資源集中在最有希望的候選克隆上來(lái)降低放大成本。通過(guò)結(jié)合深度克隆表型分析、高通量工作流程和易于接受的成本，配備Population Dynamics分析功能的Opto CLD試劑盒為細(xì)胞系開(kāi)發(fā)的每個(gè)階段帶來(lái)了更高水平的洞察力。應(yīng)用場(chǎng)景包括：穩(wěn)定性預(yù)測(cè)：提前識(shí)別那些“隱藏不穩(wěn)定因素”的克隆，檢測(cè)可能導(dǎo)致未來(lái)滴度不穩(wěn)定的行為。克隆重新排序：使用高重復(fù)性數(shù)據(jù)根據(jù)生產(chǎn)力重新排序克隆，改善與生物反應(yīng)器結(jié)果的相關(guān)性，正如先前在基于CHO和基于酵母[5]的生產(chǎn)系統(tǒng)中已證明的那樣。細(xì)胞池階段風(fēng)險(xiǎn)降低：利用OptoSelect®芯片評(píng)估轉(zhuǎn)染策略在細(xì)胞池階段的表現(xiàn)，在開(kāi)發(fā)早期識(shí)別有希望的候選者。03立即行動(dòng)變革您的CLD工作流程！是時(shí)候告別克隆選擇的“賭博”，邁向數(shù)據(jù)驅(qū)動(dòng)的精準(zhǔn)決策了。Opto™ CLD with Population Dynamics Kit助您：

√解鎖深度洞察，看清克隆內(nèi)部真相
√加速開(kāi)發(fā)時(shí)間，將穩(wěn)定性評(píng)估提前數(shù)月
√大幅降低風(fēng)險(xiǎn)，節(jié)約昂貴的放大成本