瑞孚迪pHSense™ Eu高信噪比熒光探針的優(yōu)勢(shì)

高信噪比+免洗流程+廣泛兼容性，讓內(nèi)吞檢測(cè)不再困難

在抗體偶聯(lián)藥物（ADC）和GPCR靶點(diǎn)藥物研發(fā)中，內(nèi)吞效率是決定藥物療效的關(guān)鍵因素。然而，傳統(tǒng)檢測(cè)方法一直面臨著背景干擾強(qiáng)、操作復(fù)雜、通量低等痛點(diǎn)。

瑞孚迪（Revvity）新推出的pHSense™ Eu探針，通過將pH敏感型Eu探針與時(shí)間分辨熒光（TRF）檢測(cè)技術(shù)巧妙結(jié)合，為ADC及GPCR研究帶來了突破性解決方案！

傳統(tǒng)內(nèi)吞檢測(cè)方法面臨哪些困境？

ADC內(nèi)吞檢測(cè)方面，傳統(tǒng)方法各有局限：

l 基于活細(xì)胞成像+pH探針的檢測(cè)：儀器成本高，懸浮細(xì)胞成像困難，信噪比低

l 基于毒素偶聯(lián)的殺傷檢測(cè)：易受非特異性影響產(chǎn)生假陽性，不支持實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)檢測(cè)

l 基于流式+pH探針的檢測(cè)：背景熒光高，需避光操作，重復(fù)性一般

l 基于溫度轉(zhuǎn)變的熒光二抗檢測(cè)：不能實(shí)現(xiàn)定量標(biāo)準(zhǔn)化，重復(fù)性差

GPCR內(nèi)吞檢測(cè)方面：

l 基于報(bào)告基因技術(shù)：僅適用于基因改造細(xì)胞系，成本高昂

l 酶片段互補(bǔ)技術(shù)：僅適用于特定修飾細(xì)胞系，不支持實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)檢測(cè)

pHSense™ Eu探針的三大創(chuàng)新優(yōu)勢(shì)

1. 創(chuàng)新原理：低背景、高信噪比檢測(cè)

pH敏感激活機(jī)制：探針在胞外中性環(huán)境（pH≥7）時(shí)熒光信號(hào)極弱，當(dāng)被內(nèi)吞進(jìn)入內(nèi)體/溶酶體（pH 4.5-6.5）后，信號(hào)強(qiáng)度和壽命隨pH值降低而顯著增強(qiáng)。

TRF技術(shù)提升信噪比：620nm毫秒級(jí)熒光壽命搭配微秒級(jí)延遲檢測(cè)，輕松消除背景中非特異性信號(hào)干擾。

2. 操作簡(jiǎn)便：適配高通量檢測(cè)

采用“免洗”流程結(jié)合酶標(biāo)儀檢測(cè)，大大簡(jiǎn)化操作步驟。以貼壁細(xì)胞為例，只需四步：細(xì)胞鋪板 → 棄上清 → 加樣孵育 → 酶標(biāo)儀讀數(shù)。

僅需帶TRF模塊的酶標(biāo)儀就可在約3分鐘內(nèi)采集96孔數(shù)據(jù)，支持96和384孔板通量，大幅提升檢測(cè)效率。

3. 廣泛兼容性

兼容多種細(xì)胞類型：無論是懸浮細(xì)胞還是貼壁細(xì)胞，都能獲得優(yōu)異的檢測(cè)效果，支持動(dòng)力學(xué)檢測(cè)和終點(diǎn)法檢測(cè)。

在實(shí)際應(yīng)用中，使用pHSense™ Eu檢測(cè)曲妥珠單抗在BT-474貼壁細(xì)胞中的內(nèi)吞信號(hào)呈現(xiàn)劑量依賴型增強(qiáng)，與靶標(biāo)HER2的特異性結(jié)合能力符合預(yù)期藥效曲線。

對(duì)于傳統(tǒng)細(xì)胞成像技術(shù)難以處理的懸浮細(xì)胞內(nèi)吞檢測(cè)，pHSense™ Eu同樣表現(xiàn)出色。使用該探針檢測(cè)利妥昔單抗在Raji懸浮細(xì)胞中的內(nèi)吞信號(hào)及動(dòng)力學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，為抗體藥或ADC在非貼壁細(xì)胞系中的評(píng)價(jià)提供了簡(jiǎn)潔、高效的標(biāo)準(zhǔn)化解決方案。

兼容不同的ADC結(jié)構(gòu)：能夠克服傳統(tǒng)方法對(duì)ADC結(jié)構(gòu)差異的敏感性，為不同DAR值、連接子類型的ADC提供可比性數(shù)據(jù)。

實(shí)驗(yàn)表明，使用pHSense™探針檢測(cè)曲妥珠單抗及其不同結(jié)構(gòu)ADC藥物時(shí)，所有測(cè)試樣本均呈現(xiàn)劑量依賴性內(nèi)吞信號(hào)增強(qiáng)，且EC50值幾乎一致。

兼容多種細(xì)胞系：支持SNAP-tag、Flag-tag的商品化細(xì)胞系及原代細(xì)胞系，靈活適配不同研究模型。

對(duì)于GPCR藥物研發(fā)，pHSense™ Eu探針可輕松實(shí)現(xiàn)GPCR內(nèi)化過程的動(dòng)態(tài)全景監(jiān)測(cè)，為GPCR類藥物開發(fā)提供了從分子機(jī)制到臨床轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵評(píng)估工具。

pHSense™ Eu探針以“高信噪比+高通量+酶標(biāo)儀實(shí)時(shí)檢測(cè)”三位一體的優(yōu)勢(shì)，成功突破了內(nèi)吞檢測(cè)的技術(shù)瓶頸，將有力推動(dòng)ADC/GPCR藥物從靶點(diǎn)驗(yàn)證到臨床前研究的全程加速！