霉菌與酵母菌的鑒定方法分類與操作流程

霉菌和酵母菌均屬于真菌界，但在形態(tài)、生理及生態(tài)特性上存在顯著差異。其鑒定方法結(jié)合傳統(tǒng)技術(shù)與現(xiàn)代分子生物學(xué)手段，旨在準(zhǔn)確區(qū)分種類，尤其在醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)和環(huán)境監(jiān)測中具有重要意義。
 
一、鑒定方法分類
 
1、傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定
 
霉菌：
 
菌落觀察：菌落形態(tài)（絨毛狀、棉絮狀）、顏色（如青霉的藍(lán)綠色）、邊緣特征。
 
顯微結(jié)構(gòu)：菌絲分隔與否、孢子類型（分生孢子、孢囊孢子）及產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)（孢子囊、分生孢子梗）。
 
示例：曲霉的頂囊和分生孢子鏈，毛霉的無隔菌絲及孢囊孢子。
 
酵母菌：
 
菌落特征：光滑濕潤、多為乳白色（如釀酒酵母）。
 
顯微鏡檢：單細(xì)胞形態(tài)（橢圓形、圓形）、出芽繁殖（芽痕）、假菌絲形成（如念珠菌屬）。
 
2、生理生化特性分析
 
碳/氮源利用：API 20C系統(tǒng)測試糖類同化（如酵母對葡萄糖 vs. 乳糖的利用）。
 
發(fā)酵試驗：酵母的產(chǎn)氣能力（杜氏管觀察CO₂）。
 
溫度耐受：白色念珠菌在37℃生長良好，多數(shù)環(huán)境霉菌偏好25-30℃。
 
顯色培養(yǎng)基：CHROMagar™快速區(qū)分致病性念珠菌（如白色念珠菌顯綠色）。
 
3、分子生物學(xué)技術(shù)
 
靶基因測序：
 
霉菌：ITS區(qū)域（內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)）為主，輔以β-tubulin基因。
 
酵母菌：D1/D2區(qū)（26S rDNA）或ITS測序，如隱球菌的鑒定。
 
MALDI-TOF MS：基于蛋白質(zhì)譜快速鑒定至種水平，適用于臨床酵母分離株。
 
全基因組測序：研究毒力基因或耐藥性（如耐氟康唑的假絲酵母菌）。
 
二、鑒定流程
 
1、樣本處理：無菌采集后預(yù)處理（研磨、稀釋），選擇性培養(yǎng)基抑制細(xì)菌（含氯霉素的SDA）。
 
2、分離培養(yǎng)：
 
霉菌：沙氏葡萄糖瓊脂（SDA）或馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA），25-28℃培養(yǎng)3-7天。
 
酵母菌：YPD培養(yǎng)基或麥芽汁瓊脂，30℃培養(yǎng)24-48小時。
 
3、初步篩選：菌落形態(tài)、顏色、氣味（如紅酵母的紅色素）。
 
4、深入鑒定：
 
形態(tài)不明確時，采用小培養(yǎng)（霉菌）或玉米粉瓊脂誘導(dǎo)酵母假菌絲。
 
生理試驗（尿素酶試驗區(qū)分新型隱球菌）。
 
分子確認(rèn)：PCR擴增后測序比對GenBank數(shù)據(jù)庫。
 
三、應(yīng)用與挑戰(zhàn)
 
1、臨床診斷：快速鑒定病原真菌（如煙曲霉、白色念珠菌）指導(dǎo)抗真菌治療。
 
2、工業(yè)監(jiān)控：發(fā)酵過程中污染菌的檢測（如魯氏接合酵母污染果汁）。
 
3、難點：
 
雙相真菌：需在不同溫度下培養(yǎng)（如組織胞漿菌在37℃呈酵母相）。
 
近緣種區(qū)分：需多基因聯(lián)合分析（如曲霉屬的復(fù)合種）。
 
四、技術(shù)進(jìn)展
 
1、自動化系統(tǒng)：VITEK 2 YST卡實現(xiàn)酵母快速鑒定（4-18小時）。
 
2、宏基因組學(xué)：環(huán)境樣本中直接檢測真菌群落，無需培養(yǎng)。
 
3、CRISPR檢測：開發(fā)特異性探針用于即時診斷（如熱帶念珠菌的快速識別）。
 
五、總結(jié)
 
霉菌與酵母菌的鑒定需綜合形態(tài)、生理及分子特征，傳統(tǒng)方法為基礎(chǔ)，分子技術(shù)提升精確度。未來趨向于高通量、自動化，以滿足臨床和環(huán)境監(jiān)測的快速需求。