從零掌握小鼠腦立體定位：實(shí)驗(yàn)步驟與技巧全解析

——小鼠腦立體定位技術(shù)全解析
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

1. 掌握腦立體定位技術(shù)的基本原理與操作要點(diǎn)；

2. 熟悉腦立體定位儀及腦圖譜的使用方法，為后續(xù)神經(jīng)損毀、刺激、電生理及藥理研究打下基礎(chǔ)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

腦立體定位技術(shù)是一種廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的精確定位方法。通過腦立體定位儀及腦圖譜的配合，可根據(jù)顱骨上的解剖標(biāo)志（如前囟、后囟、耳道、眼眶或矢狀縫等）建立三維坐標(biāo)體系，從而確定腦內(nèi)特定結(jié)構(gòu)的位置。
這種方法無需直視腦組織即可在皮層下進(jìn)行藥物注射、電刺激、損毀或記錄等操作，是神經(jīng)解剖學(xué)、神經(jīng)生理學(xué)、神經(jīng)藥理學(xué)及神經(jīng)外科研究中不可或缺的實(shí)驗(yàn)手段。
常見的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物包括小鼠、大鼠、貓及部分鳥類等，只要具備完整的外耳道即可使用耳棒進(jìn)行定位。根據(jù)腦圖譜提供的坐標(biāo)數(shù)據(jù)，即可實(shí)現(xiàn)精確操作。

三、實(shí)驗(yàn)材料

腦立體定位儀（如科月華誠牌腦立體定位儀）、MC-5微操作儀、常規(guī)顯微外科器械、鉆孔針、1ml注射器、生理鹽水、3%雙氧水、0.4%戊巴比妥鈉（現(xiàn)配現(xiàn)用）、75%酒精、碘伏、紗布、干棉球、實(shí)驗(yàn)用小鼠。

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四、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 儀器檢查與校準(zhǔn)

在正式實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)對(duì)腦立體定位儀進(jìn)行全面校準(zhǔn)：

• 檢查電極移動(dòng)架三維滑尺是否保持垂直，利用三角板確認(rèn)直角精度；

• 檢查各連接部件和螺絲是否松動(dòng)，滑尺是否靈活；

• 確認(rèn)主框兩臂平行、耳桿裝置對(duì)稱，小框與主框保持水平；

• 將耳桿前后滑動(dòng)，確�？潭纫恢�，尖端相互對(duì)準(zhǔn)；

• 取下耳桿后安裝電極移動(dòng)架，反復(fù)校準(zhǔn)電極尖端與耳桿中心點(diǎn)位置，確保三個(gè)滑尺讀數(shù)一致；

• 最后用水平儀調(diào)整前后、左右滑道水平，保證定位基準(zhǔn)面準(zhǔn)確。

2. 定位系統(tǒng)設(shè)置

小鼠腦定位常用兩種方式：
（1）耳間線定位法：
將兩耳棒尖端在儀器滑道中相接，確保讀數(shù)一致并固定。以耳棒中心點(diǎn)為A點(diǎn)（耳間線中心），記下坐標(biāo)。再將定位針移動(dòng)至門齒鉤上方接觸其平面，設(shè)定為H0（水平原點(diǎn)）。此時(shí)前囟與后囟基本在同一水平面上。
（2）顱骨標(biāo)志定位法：
以前囟為原點(diǎn)（前后方向0點(diǎn)），向前為正，向后為負(fù)，其余方向坐標(biāo)參照耳間線法確定。

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3. 實(shí)驗(yàn)操作流程

（1）動(dòng)物麻醉
選取體重20–30g的小鼠，稱重后按體重計(jì)算劑量，用0.4%戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔注射。注射過程中動(dòng)作要緩慢，密切觀察動(dòng)物反應(yīng)。

（2）固定動(dòng)物
將小鼠門齒掛在上頜固定器上，插入一側(cè)耳棒至外耳道后固定，調(diào)整頭部使其居中，再插入另一側(cè)耳棒并鎖緊。最后壓下鼻環(huán)并固定，使動(dòng)物頭部穩(wěn)固不動(dòng)。

（3）頭部處理與開顱
剪去頭頂部毛發(fā)，用碘伏和75%酒精交替消毒。沿矢狀縫縱向切開皮膚約3cm，輕輕剝離皮下組織。用雙氧水清除顱骨表面筋膜與血跡，暴露前囟、人字縫及矢狀縫。

（4）定位參照
將定位針垂直移動(dòng)至矢狀縫上方，調(diào)整至前囟點(diǎn)，記錄坐標(biāo)值作為基準(zhǔn)。

（5）目標(biāo)區(qū)域定位
以小鼠海馬為例：前囟后移2mm，矢狀縫旁開2.5mm，即為目標(biāo)定位點(diǎn)。在該點(diǎn)鉆一微小圓孔，避免穿透硬腦膜。

（6）藥物注射
將1ml注射器吸入藥液，安裝于MC-5微操作儀上，使針尖緩慢下降2mm至海馬區(qū)，完成注射。注射后停針片刻，再緩慢拔出，防止藥液回流。

（7）定位驗(yàn)證
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，可通過紅色示蹤染料注射并制作腦切片，顯微鏡下觀察染料分布，驗(yàn)證注射部位是否準(zhǔn)確。

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五、日常維護(hù)

1. 操作儀器時(shí)輕拿輕放，防止碰撞損壞；

2. 嚴(yán)格按照儀器使用范圍選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；

3. 實(shí)驗(yàn)后及時(shí)清潔儀器，保持滑道與螺紋的順暢；

4. 定期檢查刻度與水平是否偏移，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。

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六、實(shí)驗(yàn)總結(jié)

腦立體定位技術(shù)以其高精度和可重復(fù)性，在神經(jīng)科學(xué)研究中具有不可替代的地位。掌握該技術(shù)，不僅能實(shí)現(xiàn)腦區(qū)精確注射、損毀或電刺激，還能為藥物作用機(jī)制及腦功能研究提供重要工具。使用科月華誠腦立體定位儀，可在操作靈敏度、標(biāo)尺精度及穩(wěn)定性方面獲得更高實(shí)驗(yàn)效率與結(jié)果可靠性。