PCR實(shí)驗(yàn)室污染后的應(yīng)急處理方法步驟介紹

瀏覽次數(shù)：144　發(fā)布日期：2025-12-3　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

PCR實(shí)驗(yàn)室污染后的應(yīng)急處理方法主要包括以下幾個(gè)步驟：

一、樣本溢出污染處理：

1. 吸水紙覆蓋，傾倒10%次氯酸消毒劑靜置30分鐘
2. 75%酒精噴灑后紫外照射1小時(shí)。

二、氣溶膠污染污染處理：

‌消毒‌：用1000mg/L次氯酸消毒液噴霧操作區(qū)，關(guān)閉門窗后開啟紫外燈照射4小時(shí)以上。
‌設(shè)備處理‌：移液槍前端用2000mg/L次氯酸擦拭，生物安全柜更換過(guò)濾網(wǎng)。

三、質(zhì)粒/產(chǎn)物污染

‌器具處理‌：離心管架、吸嘴盒等用500mg/L次氯酸浸泡2小時(shí)，清水沖洗后紫外照射。
‌表面清潔‌：實(shí)驗(yàn)臺(tái)面用1mol/L鹽酸擦拭降解DNA殘留。

四、樣本交叉污染

‌環(huán)境消毒‌：地板、墻面用500mg/L次氯酸全面清潔，通風(fēng)系統(tǒng)切換至外循環(huán)模式。
‌驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)‌：連續(xù)3天陰性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增且空白樣本檢測(cè)陰性后恢復(fù)實(shí)驗(yàn)。‌

五、反應(yīng)液污染處理：

使用DNase I法：在PCR混合液中加入0.5U DNase I，室溫反應(yīng)30分鐘后加熱滅活，再加入模板和Taq聚合酶進(jìn)行擴(kuò)增。
尿嘧啶糖苷酶（UNG）法：用dUTP代替dTTP，PCR產(chǎn)物中摻入大量dU，用UNG處理消除污染，UNG在PCR循環(huán)變性步驟中會(huì)被滅活，不影響新的PCR產(chǎn)物。

通用應(yīng)急處理流程

1、暫停實(shí)驗(yàn)并溯源
立即停止所有操作，通過(guò)陰性對(duì)照排查污染范圍（如試劑、設(shè)備或環(huán)境）。
重點(diǎn)檢查擴(kuò)增產(chǎn)物是否泄漏、樣本是否交叉污染。

2、分區(qū)域清潔消毒
工作臺(tái)/地面：用1:200稀釋的LabClean（50ml加10L水）擦拭，敏感表面需先局部測(cè)試。
生物安全柜：更換過(guò)濾器，75%酒精擦拭后紫外照射30分鐘616。

3、驗(yàn)證污染消除
使用新試劑和無(wú)污染耗材，連續(xù)3次檢測(cè)陰性對(duì)照均為陰性，方可恢復(fù)實(shí)驗(yàn)。

預(yù)防措施：

1、設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照，幫助監(jiān)測(cè)反應(yīng)體系各成分的污染情況。
2、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)戴合適的手套，避免直接接觸PCR管口。
3、使用一次性手套和耗材，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后妥善處理。
4、加試劑時(shí)盡量一次性完成，避免多次抽吸產(chǎn)生氣溶膠。
5、試劑分裝使用，減少反復(fù)凍融和取樣的次數(shù)。
6、保持實(shí)驗(yàn)室清潔，定期進(jìn)行環(huán)境消毒。
7、遵循分區(qū)操作原則，避免不同實(shí)驗(yàn)區(qū)的交叉污染。

這些措施旨在迅速控制和消除PCR污染，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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