ELISA試劑盒的常見干擾物介紹
ELISA（酶聯免疫吸附試驗）是一種高靈敏度的檢測技術，廣泛用于抗原、抗體或細胞因子的定量分析。然而，樣本中的干擾物質可能影響抗原-抗體特異性結合，造成假陽性、假陰性或結果偏移。干擾物主要分為內源性（來自機體自身）和外源性（采樣或保存不當引入）兩類。常見的干擾物質包括：
一、內源性干擾物質：
1、類風濕因子（RF）：血清中IgM、IgG型類風濕因子可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的Fc段直接結合，導致假陽性。解決方法包括使用F(ab')2替代完整IgG，或在標本稀釋液中加入熱變性IgG，以及加入2-Hydroxy-1-ethanethiol降解RF。
2、補體：固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子變構暴露Fc段的補體C1q結合位點，使C1q連接二者，造成假陽性。解決辦法是用EDTA稀釋標本，或通過熱滅活補體（53℃ 10min或56℃ 30min）。
3、嗜異性抗體：人類血清中的天然嗜異性抗體能與嚙齒類動物Ig結合，連接ELISA系統中的一抗和二抗，引起假陽性�？稍跇吮鞠♂屢褐屑尤脒^量動物Ig以中和。
4、嗜靶抗原的自身抗體：抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等自身抗體可能與靶抗原結合形成復合物，干擾抗原抗體測定結果。需在測定前用理化方法解離復合物。
5、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig抗體：由于使用鼠源性抗體治療或診斷，某些病人可能體內產生抗鼠抗體，干擾ELISA檢測。
二、外源性干擾物質
1、標本溶血
紅細胞釋放的亞鐵血紅素具有類過氧化物酶活性，催化底物顯色(假陽性)。嚴重溶血樣本應棄用。
2、細菌污染
細菌內源性酶(如辣根過氧化物酶)可催化底物產生非特異性顯色。
3、標本處理不當
抗凝不完全導致纖維蛋白殘留，洗滌不徹底時酶殘留引起假陽性。
4、抗凝劑干擾
肝素抗凝血漿增加OD值，EDTA或NaN₃抑制辣根過氧化物酶活性。
三、其他干擾因素
1、疾病與年齡因素
類風濕關節(jié)炎、紅斑狼瘡等疾病患者的嗜異性抗體，或老年人異常蛋白質均可干擾結果。
2、操作因素
加樣誤差、洗板不充分等亦可引入干擾。
四、預防策略：
1、樣本采集時避免溶血、脂濁；
2、使用專用樣本稀釋液或添加阻斷劑；
3、必要時對樣本進行預處理（如熱變性、過濾）；
4、設置合理的陰陽性對照和空白孔監(jiān)控實驗質量。
了解并控制這些干擾物質是確保ELISA檢測結果準確性的關鍵。
一、內源性干擾物質：
1、類風濕因子（RF）：血清中IgM、IgG型類風濕因子可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的Fc段直接結合，導致假陽性。解決方法包括使用F(ab')2替代完整IgG，或在標本稀釋液中加入熱變性IgG，以及加入2-Hydroxy-1-ethanethiol降解RF。
2、補體：固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子變構暴露Fc段的補體C1q結合位點，使C1q連接二者，造成假陽性。解決辦法是用EDTA稀釋標本，或通過熱滅活補體（53℃ 10min或56℃ 30min）。
3、嗜異性抗體：人類血清中的天然嗜異性抗體能與嚙齒類動物Ig結合，連接ELISA系統中的一抗和二抗，引起假陽性�？稍跇吮鞠♂屢褐屑尤脒^量動物Ig以中和。
4、嗜靶抗原的自身抗體：抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等自身抗體可能與靶抗原結合形成復合物，干擾抗原抗體測定結果。需在測定前用理化方法解離復合物。
5、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig抗體：由于使用鼠源性抗體治療或診斷，某些病人可能體內產生抗鼠抗體，干擾ELISA檢測。
二、外源性干擾物質
1、標本溶血
紅細胞釋放的亞鐵血紅素具有類過氧化物酶活性，催化底物顯色(假陽性)。嚴重溶血樣本應棄用。
2、細菌污染
細菌內源性酶(如辣根過氧化物酶)可催化底物產生非特異性顯色。
3、標本處理不當
抗凝不完全導致纖維蛋白殘留，洗滌不徹底時酶殘留引起假陽性。
4、抗凝劑干擾
肝素抗凝血漿增加OD值，EDTA或NaN₃抑制辣根過氧化物酶活性。
三、其他干擾因素
1、疾病與年齡因素
類風濕關節(jié)炎、紅斑狼瘡等疾病患者的嗜異性抗體，或老年人異常蛋白質均可干擾結果。
2、操作因素
加樣誤差、洗板不充分等亦可引入干擾。
四、預防策略：
1、樣本采集時避免溶血、脂濁；
2、使用專用樣本稀釋液或添加阻斷劑；
3、必要時對樣本進行預處理（如熱變性、過濾）；
4、設置合理的陰陽性對照和空白孔監(jiān)控實驗質量。
了解并控制這些干擾物質是確保ELISA檢測結果準確性的關鍵。
