使用延時(shí)無創(chuàng)活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)進(jìn)行癌癥研究的實(shí)驗(yàn)步驟介紹
一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
儀器設(shè)備：將 HoloMonitor® M4 放置在培養(yǎng)箱內(nèi)，并確保儀器穩(wěn)定，連接好相關(guān)電源及數(shù)據(jù)線；準(zhǔn)備配套的計(jì)算機(jī)，配置需滿足系統(tǒng)要求，安裝好 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件 。
實(shí)驗(yàn)材料：選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)容器，如 6 孔板、24 孔板、96 孔板或培養(yǎng)皿等（參考推薦容器列表選擇），準(zhǔn)備對(duì)應(yīng)容器的 HoloLid™和容器支架；獲取用于實(shí)驗(yàn)的癌細(xì)胞系，如乳腺癌細(xì)胞系 JIMT-1、三陰性乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231 等，并準(zhǔn)備相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基、血清、抗生素等細(xì)胞培養(yǎng)試劑。
耗材準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求準(zhǔn)備移液槍、移液器吸頭、無菌離心管等耗材，所有耗材需經(jīng)過無菌處理。
二、細(xì)胞接種與培養(yǎng)
細(xì)胞復(fù)蘇：從液氮罐中取出凍存的癌細(xì)胞，迅速放入 37℃水浴鍋中解凍，解凍后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管，加入適量培養(yǎng)基，1000 - 1500rpm 離心 5 分鐘，棄上清，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
細(xì)胞計(jì)數(shù)：使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或血球計(jì)數(shù)板對(duì)重懸后的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，確定細(xì)胞濃度。
細(xì)胞接種：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將癌細(xì)胞以合適的密度接種到培養(yǎng)容器中。如進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，可接種約 5% 匯合度（約 6000 - 11000 個(gè)細(xì)胞 /cm² ）的細(xì)胞 ；接種后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)容器，使細(xì)胞均勻分布。
細(xì)胞培養(yǎng)：將接種好細(xì)胞的培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)箱，在適宜的溫度（通常為 37℃）、濕度及氣體環(huán)境（5% CO₂ ）下培養(yǎng)，讓細(xì)胞貼壁生長 2 - 24 小時(shí) 。
三、HoloMonitor® M4 系統(tǒng)設(shè)置與校準(zhǔn)
啟動(dòng)軟件：打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng) HoloMonitor® M4 App Suite 軟件，等待軟件完成初始化，軟件界面加載完成后，確保儀器各組件連接正常。
自動(dòng)校準(zhǔn)：在軟件中選擇自動(dòng)校準(zhǔn)功能，按照軟件提示進(jìn)行操作，完成校準(zhǔn)后，檢查校準(zhǔn)結(jié)果是否符合要求（如光路校準(zhǔn)、焦距校準(zhǔn)等，校準(zhǔn)成功會(huì)有相應(yīng)提示），確保儀器處于最佳工作狀態(tài)。
四、實(shí)驗(yàn)樣本準(zhǔn)備與上機(jī)
樣本處理：若實(shí)驗(yàn)涉及藥物處理癌細(xì)胞，在細(xì)胞貼壁后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)配置不同濃度的藥物溶液，小心加入到培養(yǎng)容器中，注意藥物的最終工作體積需符合 HoloLid™使用要求（參考不同容器對(duì)應(yīng)的工作體積數(shù)據(jù)） 。
安裝 HoloLid™與放置樣本：將無菌的 HoloLid™替換培養(yǎng)容器的標(biāo)準(zhǔn)蓋子；把裝有細(xì)胞樣本的培養(yǎng)容器放置在對(duì)應(yīng)的容器支架上，確保容器平行放置且固定良好（使用多孔板時(shí)，將有缺口的一角朝左放置 ）；將容器支架連同樣本小心放置在 HoloMonitor® M4 的載物臺(tái)上 。
五、實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置與運(yùn)行
選擇實(shí)驗(yàn)類型：在 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件中，根據(jù)研究目的選擇相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)?zāi)K，如細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)選擇 “Kinetic Proliferation Assay”，細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)選擇 “Single Cell Tracking” 或 “Wound Healing Assay” 等 。
參數(shù)設(shè)置：設(shè)置成像時(shí)間間隔、成像時(shí)長等參數(shù)。例如，進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，可設(shè)置每隔 1 - 2 小時(shí)采集一次圖像，成像時(shí)長根據(jù)細(xì)胞增殖速度確定，一般為 24 - 96 小時(shí)；若進(jìn)行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，對(duì)于遷移速度較快的癌細(xì)胞，可縮短成像時(shí)間間隔至 15 - 30 分鐘 。
儀器設(shè)備：將 HoloMonitor® M4 放置在培養(yǎng)箱內(nèi)，并確保儀器穩(wěn)定，連接好相關(guān)電源及數(shù)據(jù)線；準(zhǔn)備配套的計(jì)算機(jī)，配置需滿足系統(tǒng)要求，安裝好 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件 。
實(shí)驗(yàn)材料：選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)容器，如 6 孔板、24 孔板、96 孔板或培養(yǎng)皿等（參考推薦容器列表選擇），準(zhǔn)備對(duì)應(yīng)容器的 HoloLid™和容器支架；獲取用于實(shí)驗(yàn)的癌細(xì)胞系，如乳腺癌細(xì)胞系 JIMT-1、三陰性乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231 等，并準(zhǔn)備相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基、血清、抗生素等細(xì)胞培養(yǎng)試劑。
耗材準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求準(zhǔn)備移液槍、移液器吸頭、無菌離心管等耗材，所有耗材需經(jīng)過無菌處理。
二、細(xì)胞接種與培養(yǎng)
細(xì)胞復(fù)蘇：從液氮罐中取出凍存的癌細(xì)胞，迅速放入 37℃水浴鍋中解凍，解凍后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管，加入適量培養(yǎng)基，1000 - 1500rpm 離心 5 分鐘，棄上清，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
細(xì)胞計(jì)數(shù)：使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或血球計(jì)數(shù)板對(duì)重懸后的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，確定細(xì)胞濃度。
細(xì)胞接種：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將癌細(xì)胞以合適的密度接種到培養(yǎng)容器中。如進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，可接種約 5% 匯合度（約 6000 - 11000 個(gè)細(xì)胞 /cm² ）的細(xì)胞 ；接種后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)容器，使細(xì)胞均勻分布。
細(xì)胞培養(yǎng)：將接種好細(xì)胞的培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)箱，在適宜的溫度（通常為 37℃）、濕度及氣體環(huán)境（5% CO₂ ）下培養(yǎng)，讓細(xì)胞貼壁生長 2 - 24 小時(shí) 。
三、HoloMonitor® M4 系統(tǒng)設(shè)置與校準(zhǔn)
啟動(dòng)軟件：打開計(jì)算機(jī)，啟動(dòng) HoloMonitor® M4 App Suite 軟件，等待軟件完成初始化，軟件界面加載完成后，確保儀器各組件連接正常。
自動(dòng)校準(zhǔn)：在軟件中選擇自動(dòng)校準(zhǔn)功能，按照軟件提示進(jìn)行操作，完成校準(zhǔn)后，檢查校準(zhǔn)結(jié)果是否符合要求（如光路校準(zhǔn)、焦距校準(zhǔn)等，校準(zhǔn)成功會(huì)有相應(yīng)提示），確保儀器處于最佳工作狀態(tài)。
四、實(shí)驗(yàn)樣本準(zhǔn)備與上機(jī)
樣本處理：若實(shí)驗(yàn)涉及藥物處理癌細(xì)胞，在細(xì)胞貼壁后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)配置不同濃度的藥物溶液，小心加入到培養(yǎng)容器中，注意藥物的最終工作體積需符合 HoloLid™使用要求（參考不同容器對(duì)應(yīng)的工作體積數(shù)據(jù)） 。
安裝 HoloLid™與放置樣本：將無菌的 HoloLid™替換培養(yǎng)容器的標(biāo)準(zhǔn)蓋子；把裝有細(xì)胞樣本的培養(yǎng)容器放置在對(duì)應(yīng)的容器支架上，確保容器平行放置且固定良好（使用多孔板時(shí)，將有缺口的一角朝左放置 ）；將容器支架連同樣本小心放置在 HoloMonitor® M4 的載物臺(tái)上 。
五、實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置與運(yùn)行
選擇實(shí)驗(yàn)類型：在 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件中，根據(jù)研究目的選擇相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)?zāi)K，如細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)選擇 “Kinetic Proliferation Assay”，細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)選擇 “Single Cell Tracking” 或 “Wound Healing Assay” 等 。
參數(shù)設(shè)置：設(shè)置成像時(shí)間間隔、成像時(shí)長等參數(shù)。例如，進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，可設(shè)置每隔 1 - 2 小時(shí)采集一次圖像，成像時(shí)長根據(jù)細(xì)胞增殖速度確定，一般為 24 - 96 小時(shí)；若進(jìn)行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，對(duì)于遷移速度較快的癌細(xì)胞，可縮短成像時(shí)間間隔至 15 - 30 分鐘 。
開始實(shí)驗(yàn)：確認(rèn)參數(shù)設(shè)置無誤后，點(diǎn)擊 “Start” 按鈕開始實(shí)驗(yàn)，HoloMonitor® M4 開始自動(dòng)采集細(xì)胞圖像，在實(shí)驗(yàn)過程中，可通過軟件界面實(shí)時(shí)查看細(xì)胞狀態(tài)和成像進(jìn)度 。
六、數(shù)據(jù)采集與分析
數(shù)據(jù)采集：實(shí)驗(yàn)過程中，HoloMonitor® M4 持續(xù)采集細(xì)胞的全息圖像，軟件自動(dòng)記錄相關(guān)數(shù)據(jù)，如細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞匯合度、細(xì)胞形態(tài)參數(shù)（面積、體積、厚度等）、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)參數(shù)（遷移距離、速度等）
數(shù)據(jù)分析：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用 HoloMonitor® M4 App Suite 軟件的分析功能對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。如在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中，軟件自動(dòng)生成細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間變化的曲線、細(xì)胞匯合度變化曲線；在細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)中，分析細(xì)胞的遷移軌跡、計(jì)算遷移速度和遷移方向等；還可利用軟件的導(dǎo)出功能，將數(shù)據(jù)導(dǎo)出至 Excel 等軟件進(jìn)行進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，如計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差，進(jìn)行顯著性差異檢驗(yàn)等 。
數(shù)據(jù)可視化：利用軟件生成彩色視頻和圖像，直觀展示癌細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的形態(tài)變化、運(yùn)動(dòng)軌跡等；也可將處理后的數(shù)據(jù)制作成圖表（如折線圖、柱狀圖），清晰呈現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用于撰寫研究報(bào)告或論文發(fā)表 。
七、使用優(yōu)勢
節(jié)省資源成本：無需昂貴消耗品與標(biāo)記試劑，減少動(dòng)手時(shí)間與細(xì)胞浪費(fèi)，單次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可重復(fù)用于多維度分析。
結(jié)果精準(zhǔn)可靠：實(shí)時(shí)連續(xù)成像（圖像捕獲率 1image/s），避免手動(dòng)取樣誤差，自動(dòng)分析減少用戶偏見，直接獲取定量測量結(jié)果。
細(xì)胞友好性高：無標(biāo)記、無光毒性，成像后細(xì)胞可繼續(xù)用于后續(xù)研究，尤其適配誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS）、原代細(xì)胞等脆弱細(xì)胞類型。
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