Western Blot轉(zhuǎn)膜技術(shù)要點(diǎn)

這個(gè)年過(guò)的有點(diǎn)崎嶇，在面對(duì)社會(huì)性問(wèn)題時(shí)疫情給我們帶來(lái)了很多正能量，相信很多還沒(méi)返校的人已經(jīng)給自己立了flag。在我們回望過(guò)去的一年，這個(gè)時(shí)代已經(jīng)變了。任何的進(jìn)步都被透明公開(kāi)的呈現(xiàn)在我們面前，而我們看到的好消息遠(yuǎn)比自己收獲的多，所以我們總?cè)滩蛔��?wèn)自己，“我成長(zhǎng)了嗎？”“我的實(shí)驗(yàn)?zāi)茼樌�些嗎�?/strong>” “我的科研之路還要繼續(xù)嗎？”
 
躺著想問(wèn)題遠(yuǎn)比站著干大事來(lái)的容易，而成功的人總是在干大事的時(shí)候不斷解決問(wèn)題并總結(jié)問(wèn)題。在科研的道路上，有如火箭式上升連發(fā)3篇Science的的90后CRISPR女神楊璐菡，有如深耕播種的共和國(guó)勛章得主袁隆平院士、屠呦呦等人，在感慨別人的成就時(shí)，我們卻不曾深究過(guò)其背后的秘訣或精神。
 
世說(shuō)“好事多磨”，小編看來(lái)并非經(jīng)歷多少磨難、重做多少實(shí)驗(yàn)才能成就好事、好實(shí)驗(yàn)，而是在成功的道路上多磨礪自己的思維并可控地執(zhí)行在實(shí)踐中。在師兄師姐們告訴你一堆他們摸索出來(lái)的道理時(shí)，你是全盤(pán)接收還是思辨下哪里不對(duì)？“這樣做就對(duì)了！”就真的對(duì)了嗎？“差不多就行了！”還能再粗糙點(diǎn)嗎？！
 
所以今天“膜法學(xué)院”開(kāi)講的第一課是：WB實(shí)驗(yàn)的轉(zhuǎn)印膜，你用對(duì)了嗎？還在一“膜”到底嗎？
選膜是個(gè)大學(xué)問(wèn)，而你將這個(gè)選擇權(quán)交誰(shuí)了呢？“我們實(shí)驗(yàn)室一直用這個(gè)，用的挺好的。”待我們看看科技革新的成果再判斷你是否有更好的選擇。
 
首先，WB常用的轉(zhuǎn)印膜一般是兩種，依據(jù)材質(zhì)分為PVDF膜（最常用）和NC膜，簡(jiǎn)要概括兩者區(qū)別如下：
表1. PVDF膜和NC膜的特性和應(yīng)用對(duì)比

 
其次，WB轉(zhuǎn)印非常考驗(yàn)實(shí)驗(yàn)者對(duì)研究的蛋白及其所屬環(huán)境是否足夠了解。豐度/表達(dá)量如何？是否需要去除高豐度雜蛋白？分子量區(qū)間多大？轉(zhuǎn)印效率如何？蛋白流失了嗎？

圖1. -P膜（左）和-PSQ膜（右）后面襯墊-PSQ膜，可以看到部分高豐度蛋白穿過(guò)-P膜滲漏到襯墊的膜上。
 
由此可見(jiàn)，膜孔徑越小，小分子蛋白（<20kDa）滲漏/流失越少，蛋白載量越高，更適合低豐度蛋白檢測(cè)。
 
其三，WB實(shí)驗(yàn)依據(jù)需要顯色的形式分為化學(xué)發(fā)光和熒光兩者，熒光WB對(duì)膜的背景要求更高，雖然可以依賴成像儀或者后期軟件進(jìn)行微調(diào)，但對(duì)于低豐度蛋白、多重?zé)晒鈾z測(cè)或者想發(fā)高分文章，還是需要原圖示人。選擇低熒光背景、高蛋白載量的膜，如下FL系列即為熒光WB最佳轉(zhuǎn)印膜選擇。

圖2. 幾種膜在熒光WB成像中的表現(xiàn)，F(xiàn)L膜具有最好的背景。
 
再者，考慮到安全因素、節(jié)約時(shí)間和經(jīng)費(fèi)，亦可選擇安全型轉(zhuǎn)印膜 Immobilon-E系列，省去甲醇預(yù)激活步驟。
 
綜上，WB轉(zhuǎn)印膜依據(jù)蛋白類型、分子量和成像形式有多種優(yōu)質(zhì)選擇。
表2. Immobilon^®轉(zhuǎn)印膜全系列產(chǎn)品選擇指南

所以在你可以有選擇的時(shí)候千萬(wàn)別湊合，每個(gè)細(xì)節(jié)都會(huì)決定我們將來(lái)的高度。

 
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