In vivo CAR-T與AlloCAR-T兩種技術(shù)的區(qū)別和優(yōu)勢
文章來源公眾號：醫(yī)藥學(xué)術(shù) 作者：醫(yī)藥學(xué)術(shù)編輯部
在今年的國際科技博覽會開幕式上，中國科學(xué)技術(shù)信息研究所發(fā)布了《顛覆性技術(shù)前瞻（2025）》報告，遴選出40項最具突破性價值技術(shù)。其中，生命科學(xué)領(lǐng)域就包括10項。如果讓您選，這10項都包括什么？思考一下~公布答案，這10項分別是：
侵入式腦機(jī)接口、AI蛋白質(zhì)生成、下一代RNA藥物、通用型CAR-T細(xì)胞療法、靶向蛋白降解技術(shù)、細(xì)胞重編程技術(shù)、大片段DNA操縱技術(shù)、異種移植技術(shù)、體電子顯微鏡和單原子編輯技術(shù)。
這10項技術(shù)是在你意料之內(nèi)還是意料之外？
看到通用型CAR-T細(xì)胞療法，我就在想，通用/異體CAR-T和in vivo CAR-T兩者都超越了傳統(tǒng)意義上的CAR-T療法，那這兩者間又有什么不同呢？從應(yīng)用角度講，哪個更有開發(fā)潛力呢？我們就一起梳理一下~
為了寫起來方便，我們統(tǒng)一稱，體內(nèi)CAR-T：in vivo CAR-T；通用/異體CAR-T：AlloCAR-T。
Allo CAR-T制備流程
先看“官方”的解釋：通過白細(xì)胞分離術(shù)從健康供體采集T淋巴細(xì)胞。病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)或基因敲入技術(shù)，可將編碼CAR的重組DNA永久整合至上述淋巴細(xì)胞內(nèi)，并可同時插入其他基因，如共刺激受體。通過上述技術(shù)還能消除T細(xì)胞中αβ T細(xì)胞受體（TCR）和CD52的表達(dá)。隨后使用抗CD3/抗CD28磁珠及細(xì)胞因子對T細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增。殘留的αβ TCR陽性細(xì)胞通過抗αβ TCR抗體進(jìn)行磁珠分選去除。最終將AlloCAR-T分裝至凍存管，在需要時運(yùn)抵醫(yī)療機(jī)構(gòu)。
通俗的講，其實就是：從健康的捐贈者（非患者本人）體內(nèi)采集T細(xì)胞→進(jìn)行基因工程改造（裝上CAR）→同時，通過基因編輯技術(shù)（如CRISPR/Cas9）敲除可能引起排斥的基因→擴(kuò)增后制成“現(xiàn)貨”產(chǎn)品，冷凍儲存→當(dāng)有患者需要時，可直接解凍輸注。
圖1 Allo CAR-T制備流程
看到“官方”的制備過程，其實我主要思考的有兩個問題：
為何要去除T細(xì)胞中αβ T細(xì)胞受體（TCR）和CD52的表達(dá)？
為何選擇使用抗CD3/抗CD28磁珠進(jìn)行T細(xì)胞擴(kuò)增？
帶著這兩個問題，又查了一些資料，總結(jié)如下：
Allo CAR-T制備過程中，去除T細(xì)胞中αβ T細(xì)胞受體和CD52，是為了解決兩大根本性挑戰(zhàn)：安全性和有效性/持久性。
去除 αβ TCR 的表達(dá)，其核心目的是防止移植物抗宿主�。�GvHD）！
什么是GvHD？
捐贈者的T細(xì)胞不僅帶有我們?nèi)斯?dǎo)入的CAR，還天然表達(dá)它們自己的TCR。捐贈者的TCR會識別患者（宿主）體內(nèi)正常組織的主要組織相容性復(fù)合體（MHC/HLA）為“外來異物”。一旦識別，這些輸入的CAR-T細(xì)胞就會攻擊患者的正常組織器官（如皮膚、肝臟、腸道等），引發(fā)GvHD。GvHD是一種非常嚴(yán)重且可能致命的并發(fā)癥。而αβ TCR是介導(dǎo)GvHD的主要TCR類型。所以要進(jìn)行去除。
去除 CD52 的表達(dá)：核心是為了解決Allo CAR-T有效性和持久性問題。
這里又不得不提到另外一個概念，宿主免疫排斥（HvGR）。什么是HvGR？患者的免疫系統(tǒng)會將輸入的、來自他人的CAR-T細(xì)胞識別為“外來物”并發(fā)動攻擊，試圖將其清除。這會導(dǎo)致CAR-T細(xì)胞在患者體內(nèi)無法擴(kuò)增或迅速被消滅，從而使治療失敗。
CD52是一種廣泛表達(dá)在T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面的蛋白。清除CD52，其實就是為了消除患者自身免疫細(xì)胞“排除異己”的能力。
圖2 Allo CAR-T療法GvHD和HvGR
根據(jù)已發(fā)表的文獻(xiàn)，Allo CAR-T療法主要有：
絕大多數(shù)還是針對血液系統(tǒng)疾病。
in vivo CAR-T
in vivo CAR-T，可簡單理解為：“體內(nèi)基因療法”。它不再是輸注細(xì)胞，而是輸注一種攜帶CAR基因的工程化病毒載體。這個載體像一枚“智能導(dǎo)彈”，進(jìn)入人體后，會尋找并感染T細(xì)胞，然后將CAR基因整合進(jìn)T細(xì)胞的DNA中，從而讓這些T細(xì)胞“原地變身”為CAR-T細(xì)胞。目前大多處于臨床前或早期臨床研究階段，技術(shù)挑戰(zhàn)更大，但如果成功，將是顛覆性的。
支持in vivo CAR-T的兩大技術(shù)平臺以及臨床進(jìn)展，我們也已經(jīng)進(jìn)行了詳細(xì)的總結(jié)，詳見“CAR-T療法之父”Carl H. June詳述：支持in vivo CAR-T的兩大平臺及臨床進(jìn)展。這里就不再贅述in vivo CAR-T的制備過程。
總結(jié)
對比一下這兩種技術(shù)：
表1 in vivo CAR-T vs Allo CAR-T
我們再設(shè)身處地的想，如果我是一個決策者，我們會選擇布局Allo CAR-T賽道還是In vivo CAR-T賽道？
我的理解是這樣：
短期可行性
Allo CAR-T技術(shù)路徑更明確，已有臨床2期數(shù)據(jù)支持其安全性，適用于血液瘤的快速商業(yè)化。例如，Allogene公司的ALLO-501A在1期試驗中總緩解率達(dá)78%，且已啟動2期研究。其挑戰(zhàn)在于療效持久性和免疫排斥的優(yōu)化，但通過基因編輯技術(shù)（如NK細(xì)胞抑制性受體敲除）可逐步改善。
長期顛覆性潛力
In vivo CAR-T代表下一代CAR-T療法的方向，通過簡化生產(chǎn)流程和降低成本，可能徹底改變CAR-T的商業(yè)模式。例如，Capstan Therapeutics（獲諾華、輝瑞等投資）和Azalea Therapeutics（CRISPR技術(shù)加持）正探索基于mRNA-LNP的體內(nèi)遞送系統(tǒng)。但需克服遞送效率和安全性問題（如載體引發(fā)的免疫原性）。
in vivo CAR-T，可簡單理解為：“體內(nèi)基因療法”。它不再是輸注細(xì)胞，而是輸注一種攜帶CAR基因的工程化病毒載體。這個載體像一枚“智能導(dǎo)彈”，進(jìn)入人體后，會尋找并感染T細(xì)胞，然后將CAR基因整合進(jìn)T細(xì)胞的DNA中，從而讓這些T細(xì)胞“原地變身”為CAR-T細(xì)胞。目前大多處于臨床前或早期臨床研究階段，技術(shù)挑戰(zhàn)更大，但如果成功，將是顛覆性的。
支持in vivo CAR-T的兩大技術(shù)平臺以及臨床進(jìn)展，我們也已經(jīng)進(jìn)行了詳細(xì)的總結(jié)，詳見“CAR-T療法之父”Carl H. June詳述：支持in vivo CAR-T的兩大平臺及臨床進(jìn)展。這里就不再贅述in vivo CAR-T的制備過程。
總結(jié)
對比一下這兩種技術(shù)：
表1 in vivo CAR-T vs Allo CAR-T
我們再設(shè)身處地的想，如果我是一個決策者，我們會選擇布局Allo CAR-T賽道還是In vivo CAR-T賽道？
我的理解是這樣：
短期可行性
Allo CAR-T技術(shù)路徑更明確，已有臨床2期數(shù)據(jù)支持其安全性，適用于血液瘤的快速商業(yè)化。例如，Allogene公司的ALLO-501A在1期試驗中總緩解率達(dá)78%，且已啟動2期研究。其挑戰(zhàn)在于療效持久性和免疫排斥的優(yōu)化，但通過基因編輯技術(shù)（如NK細(xì)胞抑制性受體敲除）可逐步改善。
長期顛覆性潛力
In vivo CAR-T代表下一代CAR-T療法的方向，通過簡化生產(chǎn)流程和降低成本，可能徹底改變CAR-T的商業(yè)模式。例如，Capstan Therapeutics（獲諾華、輝瑞等投資）和Azalea Therapeutics（CRISPR技術(shù)加持）正探索基于mRNA-LNP的體內(nèi)遞送系統(tǒng)。但需克服遞送效率和安全性問題（如載體引發(fā)的免疫原性）。
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