CD3/CD19自免雙抗研發(fā)中相關(guān)人源化小鼠模型的介紹與應(yīng)用

2025年10月1日，阿斯利康注冊(cè)了CD3/CD19雙抗AZD0486（Surovatamig）治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或系統(tǒng)性紅斑狼瘡的一期臨床試驗(yàn)。該一期臨床試驗(yàn)計(jì)劃入組48例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者，預(yù)計(jì)2028年完成。

AZD0486最初由Tenebio研發(fā)，阿斯利康在2022年7月以12.65億美元收購(gòu)。與其相似的情況屢屢發(fā)生，例如默沙東在2024年8月9日耗費(fèi)13億美元收購(gòu)CD3xCD19雙抗CN201；羅氏披露了在研自免雙抗管線CD3/CD19雙抗RG6382。為何CD3/CD19靶點(diǎn)組合能夠成為領(lǐng)域內(nèi)關(guān)注的焦點(diǎn)？今天，我們就來一起探秘CD3/CD19這一熱門靶點(diǎn)背后的科學(xué)魅力。

CD3概述
CD3是表達(dá)于T細(xì)胞膜上的關(guān)鍵表面標(biāo)志物，在T細(xì)胞活化中扮演著核心角色，并因其功能的不可或缺性而成為極具潛力的藥物靶點(diǎn)。

該分子是由四條蛋白質(zhì)鏈（CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ）構(gòu)成的復(fù)合體。其中，CD3γ、CD3δ和CD3ε的胞外結(jié)構(gòu)域兩兩配對(duì)，形成CD3γε與CD3δε兩對(duì)異二聚體；它們與T細(xì)胞受體（TCR）以及同源二聚體CD3ζζ共同組裝成完整的TCR/CD3復(fù)合物。
 

這一精密結(jié)構(gòu)是其功能的基礎(chǔ)：CD3不僅與TCR協(xié)同參與抗原識(shí)別，更重要的是，其胞內(nèi)區(qū)含有免疫受體酪氨酸激活基序（ITAM），尤其在CD3ζ鏈上分布有多個(gè)。當(dāng)TCR識(shí)別抗原后，CD3負(fù)責(zé)啟動(dòng)下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，直接調(diào)控T細(xì)胞的活化、增殖與分化。此外，該復(fù)合物在T細(xì)胞的發(fā)育成熟過程中也起著至關(guān)重要的調(diào)控作用。
 

圖2. CD3蛋白參與調(diào)控免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間^[2]

CD19概述
CD19是一種分子量約為95 kDa的跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員。作為B細(xì)胞譜系中至關(guān)重要的表面標(biāo)志物，它在從早期前B細(xì)胞到成熟B細(xì)胞的發(fā)育全程中穩(wěn)定表達(dá)，但其表達(dá)會(huì)隨著B細(xì)胞終末分化為漿細(xì)胞而消失。

圖3. B細(xì)胞分化過程中CD19表達(dá)譜^[3]

該分子的表達(dá)特征使其成為B細(xì)胞惡性腫瘤免疫治療的一個(gè)極富吸引力的靶點(diǎn)。CD19在絕大多數(shù)B細(xì)胞惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，尤其是在前體B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病（BCP-ALL）中。此外，它也廣泛高表達(dá)于急性淋巴細(xì)胞白血�。ˋLL）、慢性淋巴細(xì)胞白血�。–LL）及多種B細(xì)胞淋巴瘤，這種表達(dá)模式為靶向治療提供了良好的窗口。

CD19作為B細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵共受體，其表達(dá)與功能的異常在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）等多種自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中同樣扮演著重要角色。以SLE為例，CD19與BCR（B細(xì)胞受體）及其他表面分子（如CD21）形成復(fù)合物，共同構(gòu)成一個(gè)關(guān)鍵的信號(hào)放大模塊。在SLE患者中，研究發(fā)現(xiàn)其B細(xì)胞表面的CD19表達(dá)水平往往上調(diào)或其信號(hào)通路過度活躍。這導(dǎo)致B細(xì)胞對(duì)抗原刺激的應(yīng)答閾值降低，即使面對(duì)微弱信號(hào)也能產(chǎn)生過度活化，進(jìn)而導(dǎo)致病理性自身抗體的大量產(chǎn)生，例如抗dsDNA抗體和抗Sm抗體等。這些自身抗體是驅(qū)動(dòng)SLE免疫復(fù)合物形成、沉積并引發(fā)多組織器官（如腎臟、皮膚、關(guān)節(jié)）炎癥損傷的直接效應(yīng)因子。

結(jié)合二者的TCE雙抗
雙特異性抗體由于含有兩種抗體的特異性，可以結(jié)合同一種抗原的兩種表位或兩種不同抗原的表位。雙特異性抗體通過效應(yīng)位點(diǎn)和靶點(diǎn)位點(diǎn)發(fā)揮其功能特性。效應(yīng)位點(diǎn)起到連接募集效應(yīng)細(xì)胞、藥物分子或病毒的作用；靶點(diǎn)位點(diǎn)可以靶向到分子或細(xì)胞等。

T細(xì)胞銜接器（T Cell Engager，TCE）雙抗指的是一種能同時(shí)結(jié)合腫瘤相關(guān)抗原（TAA）和T細(xì)胞上CD3的雙特異性抗體。設(shè)計(jì)最初目的是希望將T細(xì)胞定向到腫瘤細(xì)胞，從而使T細(xì)胞能有效地殺傷腫瘤細(xì)胞。

圖4. TCE的作用機(jī)制圖解^[4]

由于CD19在B細(xì)胞惡性腫瘤與B細(xì)胞相關(guān)自免疾病中均起到關(guān)鍵作用，CD3/CD19雙抗的適應(yīng)癥也不斷擴(kuò)大。目前已獲批的用于治療耐藥急性淋巴細(xì)胞白血病的雙特異性抗體（CD3/CD19）藥物貝林妥歐單抗，也在研究階段被證實(shí)可用于治療難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自免類疾病。因此，針對(duì)CD3/CD19雙抗藥物的研發(fā)愈發(fā)火熱。

表1. 臨床一期及以上的靶向CD3/CD19雙抗雙抗藥物

圖2. 通過 ELISA 檢測(cè)野生型C57BL/6 和 hCD3EDG/hCD19(C57BL/6) 小鼠血清中 mIgG（A）和 mIgM（B）的表達(dá)。(n=6)

圖3. 野生型C57BL/6 和 hCD3EDG/hCD19(C57BL/6) 小鼠不同組織的重量。

hCD3EDG/hCD19(BALB/c) 小鼠免疫表型正常：

南模生物相關(guān)藥效評(píng)價(jià)服務(wù)
在hCD3EDG/hCD19雙靶點(diǎn)人源化小鼠的基礎(chǔ)上，南模生物可您提供疾病造模與藥效評(píng)價(jià)等多種服務(wù)，為您的相關(guān)藥物開發(fā)提供支持。

hCD3EDG/hCD19(BALB/c) 可響應(yīng)CD19/CD3雙抗藥物：

圖1. 5天重復(fù)注射 Blinatumomab后，通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量治療后小鼠肺泡中的免疫細(xì)胞：B細(xì)胞數(shù)量明顯減少，T細(xì)胞總數(shù)未改變，但CD8⁺ T細(xì)胞比例增加。

hCD3EDG/hCD19(BALB/c) 小鼠可構(gòu)建 SLE 疾病模型，并用于 SLE 藥效檢測(cè)

造模方法：

分組情況：

• G1對(duì)照組：未處理的hCD3EDG/hCD19(BALB/c) 小鼠
• G2 疾病組：使用IMQ+Pristane誘導(dǎo)發(fā)病的腎切除hCD3EDG/hCD19 小鼠
• G3給藥組：在疾病小鼠基礎(chǔ)上給藥cyclophosphamide

藥效數(shù)據(jù)：

圖1. hCD3EDG/hCD19小鼠構(gòu)建的SLE模型在疾病造模與給藥后體重均未出現(xiàn)明顯變化。(A) 體重。(B) 體重變化。

圖2. hCD3EDG/hCD19小鼠構(gòu)建的SLE模型的血清抗dsDNA IgG Ab在疾病造模后明顯增多，而在給藥后有所回落。(A) 第 28 天血清抗dsDNA IgG Ab。(B) 第 68 天的血清抗dsDNA IgG Ab。

圖3. hCD3EDG/hCD19小鼠構(gòu)建的SLE模型的尿白蛋白在疾病造模后明顯增多，而在給藥后回落至對(duì)照組水平。(A) 尿白蛋白。 (B) 尿肌酐。(C) 白蛋白與肌酐比值。(*P < 0.05,**P < 0.01 Vs Group2)。

圖4. hCD3EDG/hCD19小鼠構(gòu)建的SLE模型的脾臟與腎臟在疾病造模后明顯腫大，在給藥后脾臟大小有所回落，但腎臟大小未出現(xiàn)明顯差異。(A) 脾臟照片和腎臟照片。(B) 脾指數(shù)和腎指數(shù)。 (**P < 0.01 Vs Group2)。

圖5.hCD3EDG/hCD19小鼠構(gòu)建的SLE模型的腎臟 H&E 病理學(xué)分析：疾病造模后系膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞增生，伴多形核中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，常伴有白金耳或新月體形成，出現(xiàn)明顯的狼瘡性腎炎表型；而在給藥后該表型出現(xiàn)明顯緩解。（A）代表性 H&E 圖像。(B)組織病理學(xué)評(píng)分。(*P < 0.05 Vs Group2)。

圖6. hCD3EDG/hCD19小鼠構(gòu)建的SLE模型的腎臟 IHC 病理學(xué)分析：疾病造模后腎臟IgG呈強(qiáng)陽(yáng)性表現(xiàn)；而在給藥后IgG陽(yáng)性信號(hào)減少。(A) 系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型的代表性 IHC 圖像。(B) mIgG 陽(yáng)性細(xì)胞百分比。

Reference：
1.Carl H. June et al. ,CAR T cell immunotherapy for human cancer. Science 359,1361-1365(2018). DOI:10.1126/science.aar6711

2.Acuto, O., Bartolo, V. & Michel, F. Tailoring T-cell receptor signals by proximal negative feedback mechanisms. Nat Rev Immunol 8, 699–712 (2008). https://doi.org/10.1038/nri2397.

3.Williams JP, Meyers JA. Immune-mediated inflammatory disorders (I.M.I.D.s): the economic and clinical costs. Am J Manag Care. 2002 Dec;8(21 Suppl):S664-81; quiz S682-5. PMID: 12516953.

4.Taubmann J, Müller F, Yalcin Mutlu M, Völkl S, Aigner M, Bozec A, Mackensen A, Grieshaber-Bouyer R, Schett G. CD19 Chimeric Antigen Receptor T Cell Treatment: Unraveling the Role of B Cells in Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis Rheumatol. 2024 Apr;76(4):497-504. doi: 10.1002/art.42784. Epub 2024 Jan 29. Erratum in: Arthritis Rheumatol. 2025 Mar;77(3):365. doi: 10.1002/art.43080. PMID: 38114423.

5.Einsele H, Borghaei H, Orlowski RZ, Subklewe M, Roboz GJ, Zugmaier G, Kufer P, Iskander K, Kantarjian HM. The BiTE (bispecific T-cell engager) platform: Development and future potential of a targeted immuno-oncology therapy across tumor types. Cancer. 2020 Jul 15;126(14):3192-3201.

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