ANGPTL7&NRL人源化小鼠在青光眼與視網(wǎng)膜色素變性廣譜療法研發(fā)的應(yīng)用

眼科疾病是全球健康領(lǐng)域的重大挑戰(zhàn)，其中青光眼和視網(wǎng)膜色素變性（RP）是導(dǎo)致不可逆失明的主要病因，影響全球數(shù)千萬(wàn)人的生活質(zhì)量。這兩類疾病的遺傳異質(zhì)性極高，涉及數(shù)百種基因突變，傳統(tǒng)基因療法因突變靶點(diǎn)分散而受限。因此，開(kāi)發(fā)“基因不限（Gene-agnostic）”的廣譜療法已成為眼科藥物研發(fā)的迫切需求 ^[1]。為攻克這一難題，研究人員將目光投向了調(diào)控疾病共同病理通路的關(guān)鍵靶點(diǎn)。賽業(yè)生物針對(duì)近期發(fā)現(xiàn)的潛在廣譜性治療靶點(diǎn)ANGPTL7和NRL，推出了B6-hANGPTL7和B6-hNRL全人源化模型，旨在提供精準(zhǔn)的臨床前驗(yàn)證平臺(tái)，從而助力開(kāi)發(fā)適用于廣泛患者群體的創(chuàng)新療法。

圖1. 常見(jiàn)的眼科/視網(wǎng)膜疾病類型 ^[2]。

青光眼與ANGPTL7：靶向眼壓調(diào)控的突破性靶點(diǎn)
青光眼是一種以病理性高眼壓（IOP）為主要特征的進(jìn)行性視神經(jīng)病變，是全球第二大致盲原因，影響約8000萬(wàn)人，預(yù)計(jì)到2040年患者數(shù)量將超過(guò)1.11億 ^[3]。臨床上，控制眼壓是延緩疾病進(jìn)展的唯一有效手段。然而，青光眼的遺傳異質(zhì)性極高，國(guó)際青光眼遺傳學(xué)聯(lián)盟（IGGC）的研究表明，超過(guò)300個(gè)基因與青光眼風(fēng)險(xiǎn)相關(guān) ^[4]。

圖2. 正常眼球和青光眼患者眼球的對(duì)比 ^[5]。

血管生成素樣因子7（ANGPTL7）是青光眼治療的新興靶點(diǎn)，因其在負(fù)責(zé)房水流出的關(guān)鍵組織——小梁網(wǎng)（TM）中高度表達(dá)，并在維持眼壓方面發(fā)揮關(guān)鍵作用而備受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，ANGPTL7表達(dá)水平升高與眼壓上升直接相關(guān)，且在青光眼患者的房水中其水平顯著上調(diào)。遺傳學(xué)證據(jù)亦表明，攜帶ANGPTL7基因功能喪失性變異的人群，其眼壓顯著低于正常人群，并能有效預(yù)防青光眼 ^[6-7]。因此，通過(guò)抑制ANGPTL7來(lái)降低眼壓，有望成為一種不受突變基因型限制的廣譜性青光眼療法。

圖3. 攜帶ANGPTL7 pLOF突變?nèi)巳旱钠骄�眼壓（IOP）明顯低于非攜帶者 ^[6]。

鑒于此，ANGPTL7抑制劑展現(xiàn)出巨大的治療潛力。Regeneron與Alnylam正在合作開(kāi)發(fā)靶向ANGPTL7的siRNA療法，而Alloy Therapeutics與Maze Therapeutics的合資公司Broadwing Bio也在研發(fā)ANGPTL7靶向抗體。這些處于早期研發(fā)階段的分子，均在臨床前研究中顯示出降低眼壓、延緩青光眼病程的潛力 ^[8-9]。

圖4. ANGPTL7特異性抗體能夠在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)有效降低眼壓（IOP） ^[9]。

賽業(yè)生物構(gòu)建的B6-hANGPTL7人源化小鼠（產(chǎn)品編號(hào)：C001789）將小鼠Angptl7基因的編碼區(qū)、非編碼區(qū)及兩側(cè)調(diào)控序列完整替換為對(duì)應(yīng)的人類ANGPTL7基因序列，模擬其在人體內(nèi)的功能。結(jié)合地塞米松誘導(dǎo)等青光眼模型，該模型可為評(píng)估靶向ANGPTL7治療青光眼的siRNA、抗體及小分子藥物的體內(nèi)藥效和安全性提供高效工具。

圖5. B6-hANGPTL7小鼠模型的構(gòu)建策略。

視網(wǎng)膜色素變性（RP）與NRL：普適性治療的創(chuàng)新靶點(diǎn)
視網(wǎng)膜色素變性（RP）是由超過(guò)200個(gè)不同基因突變引起的遺傳性視網(wǎng)膜疾病，其共同特征是視桿細(xì)胞進(jìn)行性死亡，繼而導(dǎo)致視錐細(xì)胞凋亡，最終造成視力喪失。全球約150萬(wàn)人受其影響，發(fā)病率約為1/3500 ^[10]。其高度的遺傳多樣性使得傳統(tǒng)基因治療受限，開(kāi)發(fā)普適性療法成為迫切需求。神經(jīng)視網(wǎng)膜亮氨酸拉鏈（NRL）轉(zhuǎn)錄因子是決定視網(wǎng)膜細(xì)胞命運(yùn)的“主開(kāi)關(guān)”，負(fù)責(zé)指導(dǎo)感光細(xì)胞前體分化為視桿細(xì)胞。突破性研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)基因編輯（如CRISPR/Cas9）或小核酸藥物（siRNA/ASO）抑制NRL表達(dá)，可將脆弱的突變視桿細(xì)胞原位重編程為功能更穩(wěn)定、對(duì)致病突變更具抵抗力的“類視錐細(xì)胞”。該策略不僅能阻止視桿細(xì)胞死亡，還能間接保護(hù)負(fù)責(zé)日間視力的視錐細(xì)胞，已在多種RP動(dòng)物模型中成功保留了視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)并恢復(fù)了視覺(jué)功能 ^[10-13]。

圖6. CRISPR介導(dǎo)的NRL敲除挽救了Rd10小鼠的視網(wǎng)膜功能 ^[11]。

由于該療法不針對(duì)特定致病基因，而是通過(guò)重塑細(xì)胞命運(yùn)來(lái)抵抗疾病，因此有望成為適用于所有類型RP患者的通用療法�？紤]到人鼠NRL的同源性差異，且已有專利明確提出使用NRL人源化小鼠進(jìn)行藥物篩選 ^[14]，開(kāi)發(fā)一款能精準(zhǔn)表達(dá)人類NRL的模型對(duì)于臨床前研究至關(guān)重要。

圖7. NRL人源化小鼠用于靶向人類NRL的siRNA藥物的篩選和敲低效率研究 ^[14]。

賽業(yè)生物的B6-hNRL人源化小鼠（產(chǎn)品編號(hào)：C001799）模型通過(guò)將小鼠Nrl基因的完整序列（包含內(nèi)含子、外顯子及兩側(cè)UTR區(qū)域）替換為人類NRL的對(duì)應(yīng)序列，構(gòu)建了高度模擬人類NRL功能的平臺(tái)。該模型特別適用于驗(yàn)證靶向人NRL的CRISPR、siRNA或ASO療法的藥效，結(jié)合Rd10等RP疾病模型，可評(píng)估療法的長(zhǎng)期效果，為開(kāi)發(fā)廣譜RP療法提供關(guān)鍵支持。

圖8. B6-hNRL小鼠模型的構(gòu)建策略。

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