Blood（IF=23.1）封面文章解讀：血小板參與血栓炎癥反應(yīng)的新機制

血小板除參與血栓與止血外，還參與調(diào)控炎癥和免疫反應(yīng)，尤其是在血栓炎癥性疾�。ㄈ纾簲⊙�癥、心血管疾病等）中發(fā)揮關(guān)鍵作用^[1-3]。NLRP6屬于炎性復(fù)合體家族成員之一，主要參與腸道免疫，維持腸道微生態(tài)。研究顯示NLRP6有促炎和抑炎雙重作用，取決于不同的細胞和組織^[4-6]。鑒于血小板在血栓炎癥中的關(guān)鍵作用，其是否在血小板內(nèi)表達目前尚不清楚。

2025年7月17日，徐州醫(yī)科大學(xué)血液病研究所喬建林教授團隊在血小板和血栓炎癥領(lǐng)域取得重要進展。相關(guān)研究成果“Platelet NLRP6 protects against microvascular thrombosis in sepsis”，以封面文章形式發(fā)表在血液學(xué)領(lǐng)域頂級期刊Blood（IF=23.1，中科院1區(qū)Top期刊）^[7]。

圖片來源：《Blood》

研究材料
NLRP6^flox/flox小鼠（由賽業(yè)生物提供）、PF4-CRE小鼠和野生型小鼠
研究方法
流式細胞術(shù)、動脈血栓模型，膿毒癥模型、出血模型、蛋白印跡、蛋白質(zhì)譜分析、免疫熒光等。
技術(shù)路線

研究結(jié)果
1. 血小板表達NLRP6，且其缺失顯著增加膿毒癥小鼠的生存期和微血栓形成
為探索NLRP6是否在血小板內(nèi)表達，研究人員檢測了人和小鼠血小板內(nèi)NLRP6的表達，證實NLRP6在血小板內(nèi)表達（圖1）。為進一步研究其在血栓炎癥反應(yīng)中的作用，研究人員構(gòu)建了血小板特異性NLRP6敲基因小鼠（由賽業(yè)生物提供）。利用膿毒癥血栓炎癥模型，發(fā)現(xiàn)血小板NLRP6缺失顯著降低膿毒癥小鼠生存期并增加肺和肝臟微血栓形成。

圖1 血小板NLRP6在膿毒癥生存期和微血栓形成中的作用^[1]

2. NLRP6敲除顯著增強膿毒癥中血小板的活化、血小板與中性粒細胞結(jié)合及中性粒細胞的浸潤
為探索NLRP6對膿毒癥中血小板活性的影響，研究者分離不同時間點膿毒癥小鼠的血小板，檢測了血小板的活化及血小板與中性粒細胞結(jié)合，發(fā)現(xiàn)NLRP6缺失顯著增強血小板活化（P-selectin表達）和血小板與中性粒細胞結(jié)合。此外，免疫熒光發(fā)現(xiàn)NLRP6缺失顯著促進中性粒細胞向肺臟的聚集、血小板與中性粒細胞結(jié)合及中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)的形成（圖2）。

圖2 NLRP6敲除顯著促進膿毒癥中血小板和中性粒細胞的活化及NETs形成^[1]

3. NLRP6缺失顯著增強血小板的功能
進一步血小板功能分析發(fā)現(xiàn)，NLRP6缺失顯著增加了體外血小板的聚集能力、顆粒釋放、活化、鈣動員及促凝活性，同時參與體內(nèi)止血和動脈血栓形成能力也顯著增強（圖3）。

圖3 NLRP6對血小板功能的影響^[1]

4. NLRP6敲除促進血小板NF-kB信號的活化
為進一步探索NLRP6對血小板信號通路的影響，研究者檢測了NF-kB的活化發(fā)現(xiàn)NLRP6敲除血小板在刺激后NF-kB信號通路顯著增強，而抑制NF-kB活化后則可顯著降低NLRP6敲除血小板的高反應(yīng)性，提示NLRP6可能通過影響NF-kB信號通路調(diào)控血小板功能（圖4）。

圖4 NLRP6敲除后對血小板NF-kB信號通路的影響^[1]

5. NLRP6通過介導(dǎo)TRIM21與TAB1結(jié)合，引起TAB1發(fā)生泛素化修飾和降解
為進一步探索NLRP6調(diào)控NF-kB信號通路的機制，研究人員首先檢測了TABs復(fù)合物的表達，發(fā)現(xiàn)NLRP6敲除血小板在活化后TAB1的表達量并未有所改變，而正常血小板活化后TAB1的表達量顯著降低，提示NLRP6可能影響血小板活化后TAB1的表達。進一步分析發(fā)現(xiàn)，NLRP6調(diào)控TAB1發(fā)生泛素化修飾和降解。利用IP-MS方法，研究人員鑒定了TRIM21是介導(dǎo)TAB1發(fā)生泛素化修飾的主要E3連接酶，而NLRP6在兩者之間起“橋梁”作用（圖5）。

圖5 NLRP6介導(dǎo)TRIM21與TAB1結(jié)合引起TAB1泛素化修飾和降解^[1]

6. 抑制NF-kB信號通路減輕膿毒癥中血小板活化和微血栓形成
為驗證NLRP6敲除后引起的膿毒癥嚴(yán)重程度的加劇是否由NF-kB信號通路所引起，研究人員使用了NF-kB信號通路抑制劑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑制NF-kB信號通路顯著抑制了膿毒癥中NLRP6敲除血小板的活化、中性粒細胞的募集、NETs和微血栓形成及顯著提高了生存率（圖6）。

圖6 抑制NF-kB信號通路減輕膿毒癥中血小板活化和微血栓形成^[1]

7. 膿毒癥血漿促進NLRP6/TRIM21/TAB1相互作用并誘導(dǎo)TAB1降解
最后，研究人員探討了膿毒癥血漿對血小板NLRP6-TRIM21-TAB1軸的影響，發(fā)現(xiàn)膿毒癥血漿可誘導(dǎo)血小板p65磷酸化，TAB1蛋白降解、和NLRP6/TRIM21/TAB1的相互作用。此外，抑制TLR4或 MyD88預(yù)處理可阻斷上述效應(yīng)，表明膿毒癥血漿通過TLR4/MyD88信號激活血小板NLRP6-TRIM21復(fù)合體，動態(tài)調(diào)控TAB1降解以限制NF-κB過度活化。

研究結(jié)論

圖7 血小板NLRP6在膿毒癥微血栓形成和血栓炎癥中發(fā)揮保護作用^[1]

本研究利用巨核細胞/血小板特異性NLRP6敲基因小鼠及IP-MS等方法，發(fā)現(xiàn)血小板NLRP6在膿毒癥微血栓形成和血栓炎癥中發(fā)揮保護作用，提示NLRP6可能是預(yù)防血栓炎癥性疾病的潛在治療靶點。

參考文獻：
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