揭秘293細(xì)胞系的“家族譜”：來源、特性與應(yīng)用全解析！

細(xì)胞來源及優(yōu)勢

1973年，HEK293細(xì)胞是從人類胚胎腎臟中分離的上皮形態(tài)細(xì)胞、后轉(zhuǎn)染了5型腺病毒（Ad5）DNA獲得的永生化細(xì)胞。自HEK293建系以來，衍生了很多細(xì)胞系，主要包括293T、293T/17、293F、293A、293E、293FT、AAV-293、293S等。293細(xì)胞系的優(yōu)勢有很多：容易轉(zhuǎn)染，能夠高效表達(dá)目的基因；作為一種哺乳動(dòng)物細(xì)胞，能夠完成復(fù)雜的翻譯后修飾，以確保蛋白功能的正確，并且更接近天然人體蛋白，可以降低免疫原性；分泌表達(dá)能力強(qiáng)、生長快速，有些細(xì)胞系適應(yīng)無血清培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)，適合大規(guī)模生產(chǎn)。293細(xì)胞常常用于生產(chǎn)重組蛋白、疫苗、慢病毒或腺相關(guān)病毒載體等。

圖1  293細(xì)胞系衍生示意圖

常用的293細(xì)胞系

HEK293：是最原始的293細(xì)胞，是由原代人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)染Ad5 DNA獲得的永生化細(xì)胞，Ad5 DNA序列整合到了19號(hào)染色體。該細(xì)胞是目前人類腺病毒載體擴(kuò)增的合適宿主。

293T：是在HEK293基礎(chǔ)上，穩(wěn)轉(zhuǎn)SV40 T-抗原基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株，攜帶SV40復(fù)制序列，被廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)、基因表達(dá)和蛋白表達(dá)。

293T/17：是293T的衍生株。克隆293T細(xì)胞，用pBND和pZAP載體檢測，獲得了能夠產(chǎn)生高滴度感染性逆轉(zhuǎn)錄病毒293T/17的細(xì)胞系。

293A：是HEK 293的亞克隆，該細(xì)胞包含穩(wěn)定整合的 E1 基因拷貝，能夠提供生成重組腺病毒所需的 E1 蛋白（E1a 和 E1b）。該細(xì)胞具有良好的貼壁能力，常用來腺病毒生產(chǎn)、擴(kuò)增和滴定。

293F：來源于HEK293（F是Fast-growth的首字母），是一種快速生長、轉(zhuǎn)染效率高的克隆株。該細(xì)胞適合用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，蛋白表達(dá)量較高，還能夠在化學(xué)成分限定的無血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)，適合工藝放大生產(chǎn)。

293FT：來源于用SV40大T抗原轉(zhuǎn)化的293F，是一種快速生長、轉(zhuǎn)染效率高的克隆分離株。該細(xì)胞可穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原，并且促進(jìn)最適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生。293FT細(xì)胞能制造高滴度的慢病毒，是制備高滴度慢病毒的最佳宿主。

293E：是由HEK293衍生而來的一株亞克隆。該細(xì)胞經(jīng)過工程改造后插入EBNA-1基因（Epstein-Barr 病毒核抗原-1），可穩(wěn)定表達(dá)EBNA-1蛋白。EBNA-1蛋白能夠與攜帶EB病毒復(fù)制起點(diǎn)（oriP）的重組表達(dá)質(zhì)粒相互作用，促進(jìn)質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)以游離型的方式進(jìn)行復(fù)制，并實(shí)現(xiàn)重組蛋白的高效表達(dá)，在重組蛋白生產(chǎn)和基因功能研究中應(yīng)用廣泛。

AAV-293：源自HEK293，AAV-293細(xì)胞反式表達(dá)腺病毒E1基因，當(dāng)共轉(zhuǎn)染三個(gè)AAV助質(zhì)粒(一個(gè)含ITR的質(zhì)粒，pAAV-RC, 和E1缺失助質(zhì)粒)時(shí)，可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關(guān)病毒顆粒。

以上是常用的293細(xì)胞系的簡單介紹，希望對大家如何挑選和使用293系列細(xì)胞有所幫助。

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