圖1.會議現(xiàn)場。森西賽智科技作為生命科學(xué)工具一站式解決方案服務(wù)商,專注生命科學(xué)儀器領(lǐng)域多年,擁有20多年技術(shù)積累和豐富的產(chǎn)品應(yīng)用案例,吸引了眾多嘉賓前來交流咨詢。期待將更多、更好的產(chǎn)品和技術(shù)介紹給各位專家、學(xué)者!
圖2. 森西賽智產(chǎn)品展示。
Vizgen中國區(qū)總經(jīng)理張曉亮先生做了精彩的專題報告,報告題目:超高分辨原位單細(xì)胞空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)MERFISH 2.0簡介與應(yīng)用進(jìn)展,從技術(shù)和應(yīng)用角度出發(fā),介紹了新一代單細(xì)胞空轉(zhuǎn)平臺MERSCOPE UltraTM和新開發(fā)的MERFISH 2.0TM空轉(zhuǎn)技術(shù),此前沿新技術(shù)可顯著提高M(jìn)ERFISH在各種樣本中,特別是在RNA質(zhì)量較低的FFPE組織樣本中的檢測靈敏度,重塑空間生物學(xué)研究圖景!我們期待將更多、更好的產(chǎn)品和技術(shù)介紹給各位專家、學(xué)者,共同推進(jìn)空間生物學(xué)發(fā)展!

圖3-4. 張曉亮先生專題報告。

一、什么是MERFISH技術(shù)?
美國Vizgen公司的MERFISH“Multiflexed Error Robust Fluorescence In-Situ Hybridization(多重抗誤差熒光原位雜交)”技術(shù),結(jié)合smFISH(單分子熒光原位雜交技術(shù))和亞細(xì)胞成像的優(yōu)勢,通過使用組合標(biāo)記、序列成像和抗誤差的條形碼編碼技術(shù)來擴展smFISH的功能,從而大幅提高了多重檢測能力,能夠?qū)崿F(xiàn)真正意義上基因可視化的原位單細(xì)胞空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,為研究人員開啟了了解每個細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄組組成與分布的窗口。
MERFISH技術(shù)誕生于美國哈佛大學(xué)莊小威院士實驗室,于2015年首次發(fā)表,此后已累計發(fā)表了300多篇經(jīng)過同行評審的文章,每年都有更多令人興奮的發(fā)現(xiàn)。憑借可靠、有價值的數(shù)據(jù)集以及值得信賴的數(shù)據(jù)質(zhì)量,該技術(shù)讓科學(xué)家對空間基因組學(xué)分析充滿信心,從而推動生物學(xué)研究。
圖7. MERFISH技術(shù)原理示意圖。二、新一代MERFISH 2.0技術(shù)
新一代的MERFISH 2.0設(shè)計,以及其優(yōu)化的樣本制備工作流程可以極大地提高樣本中的轉(zhuǎn)錄本的檢測靈敏度,大幅度提升RNA質(zhì)量較低的,如保存年限較長的FFPE組織樣本中的RNA的檢測效率和靈敏度!
MERFISH 2.0工作流程引入了:
(1)改進(jìn)RNA錨定方式以確保RNA片段的共定位,這對于維持轉(zhuǎn)錄本的完整性以及探針的可及性至關(guān)重要;
(2)優(yōu)化編碼探針結(jié)合以最大程度提高目標(biāo)位點的占有率,從而增加讀出探針結(jié)合的概率;
(3)增加和每個編碼探針結(jié)合的讀出探針數(shù)量,顯著增強熒光信號,針對性增加信噪比。
圖8. MERFISH 2.0技術(shù)原理示意圖。三、MERSCOPE Ultra分析系統(tǒng)
基于MERFISH 2.0技術(shù)的MERSCOPE Ultra“大視野超高分辨單細(xì)胞原位空間組學(xué)分析系統(tǒng)”具有高通量多重檢測能力、高細(xì)胞處理通量、支持樣本類型靈活、檢測靈敏度高和空間分辨率高等優(yōu)點。
MERSCOPE系列為腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、植物學(xué)、傳染病、細(xì)胞和基因治療等領(lǐng)域基于組織的基礎(chǔ)研究和醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)化提供了變革性的視角,也是加速藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)的重要工具。
圖9. MERSCOPE Ultra系統(tǒng)。MERSCOPE的技術(shù)特點:
空間分辨率極高:單分子分辨率<50nm,在亞細(xì)胞水平上定位RNA轉(zhuǎn)錄本;
靈敏度高:能檢測到其它方法(單細(xì)胞測序等)檢測不到的低表達(dá)基因;
成像面積大、更快的分析速度:MERSCOPE Ultra:成像面積≥3.0cm2;
高度多重:同一切片上同時檢測上千重基因與多個蛋白;MERFISH 2.0 技術(shù)適合長期保存/低質(zhì)量的FFPE樣本;
開放性與靈活性良好:針對課題可以靈活自主選擇所需基因,專用平臺高效設(shè)計基因panel。
圖10. MERSCOPE圖像示例四、PRIMO定制化細(xì)胞微環(huán)境制備系統(tǒng)
法國Alvéole公司的PRIMO“定制化細(xì)胞微環(huán)境制備系統(tǒng)”,它是創(chuàng)新性定制細(xì)胞模型的工具,能在微米級別的尺度下,用非接觸、無掩膜的光學(xué)蝕刻方法制備細(xì)胞模型、以具有超高靈活度和再現(xiàn)性的生物工程手段實現(xiàn)體外微環(huán)境的定制,同時可對其機械力學(xué)和生化特性進(jìn)行設(shè)計微調(diào),具有高度的靈活性、可控性和可重復(fù)性。選擇電腦中任意一張圖案,PRIMO都能將它投射到細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)上,利用非接觸式、無掩模的光刻技術(shù),在軟件和光敏試劑的幫助下獲得任意圖案的2D蛋白涂層或3D水凝膠或微流控結(jié)構(gòu),可用于2D微圖案化、3D細(xì)胞球構(gòu)建、3D水凝膠構(gòu)建和類器官芯片構(gòu)建,可廣泛應(yīng)用于類器官的研究。
圖11. PRIMO定制化細(xì)胞微環(huán)境制備系統(tǒng)。PRIMO有三種設(shè)計方法:
(1)第一種設(shè)計:微圖案建構(gòu)(Micropatterning)。
先在基質(zhì)上包裹一層防污涂層(antifouling layer),阻礙蛋白質(zhì)粘附。選擇電腦中任意一張圖案,在LEONARDO軟件作用下,PRIMO都能利用非接觸式、無掩模的光刻技術(shù),用UV光將它投射到細(xì)胞基質(zhì)上,在PLPP光敏引發(fā)劑幫助下,防污涂層被降解,蝕刻出微圖案,蛋白可粘附在蝕刻出的微圖案上,細(xì)胞粘附在蛋白上,可適應(yīng)于基質(zhì)上定制的生物化學(xué)、表面形貌和硬度等特征,形成定制的細(xì)胞模型。適用于細(xì)胞微環(huán)境研究。
圖12. 微圖案建構(gòu)(Micropatterning)示意圖。(2)第二種設(shè)計:水凝膠建構(gòu)(Hydrogel Structuration)。
在氧氣不足的條件下,UV光照射,可使水凝膠固化;水凝膠固化的高度隨UV照射強度增加而增加。結(jié)合UV-圖像照射和氣體可滲透的微反應(yīng)器,可獲得4種水凝膠的工程方法:完全多聚化(total polymerization)、Z軸控制的多聚化(z-controlled polymerization)、光剪切(photo-scission)和修飾(decoration)。單獨應(yīng)用或結(jié)合應(yīng)用就可以解決水凝膠工程化問題。適用于3D細(xì)胞培養(yǎng)和類器官制備。
圖13. 水凝膠建構(gòu)(Hydrogel Structuration)示意圖。(3)第三種設(shè)計:微流道建構(gòu)(Microfabrication)。
用UV光固化感光樹脂/光刻膠(photoresist),再用PDMS(聚二甲硅氧烷)在固化的photoresist上倒模,形成帶有微結(jié)構(gòu)的PDMS芯片。適用于制造微流控芯片和類器官芯片。
圖14. 微流道建構(gòu)(Microfabrication)示意圖。
五、PRIMO應(yīng)用領(lǐng)域
(1)2D微圖案建構(gòu)應(yīng)用:研究血管化類器官、細(xì)胞遷移/趨觸性、細(xì)胞黏附、細(xì)胞分裂、細(xì)胞極性、生物力學(xué)、2D細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)、冷凍電鏡的標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞制備等;
(2)3D水凝膠建構(gòu)應(yīng)用:研究類器官、3D細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)、腫瘤球培養(yǎng)等;
(3)3D微流道建構(gòu)應(yīng)用:研究微流控芯片、類器官芯片、細(xì)胞共培養(yǎng)、組織工程等。
六、關(guān)于森西賽智科技
森西賽智(北京/上海/廣州/成都)擁有超過20年的生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的自主研發(fā)和國際品牌代理經(jīng)驗,專注于國內(nèi)整合和推進(jìn)全球產(chǎn)品進(jìn)入中國的研發(fā)市場,產(chǎn)品線覆蓋分子、蛋白、細(xì)胞、組織、小動物、生物工藝和自動化等領(lǐng)域。森西賽智在全國各主要城市都有銷售或售后服務(wù)網(wǎng)點,相關(guān)工作人員均接受原廠培訓(xùn),具有雄厚的技術(shù)支持基礎(chǔ),可以為客戶提供專業(yè)周到的服務(wù)。自成立以來,“森西賽智科技有限公司”已為5300+客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)。
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