PacBio推出采用HiFi技術(shù)的桌面型長讀長測序儀Vega

隨著科學(xué)家們對復(fù)雜生物學(xué)問題的不斷探索，對于基因密碼的解碼也需要使用更多強大的組學(xué)測序工具來進(jìn)行更深入的研究。PacBio HiFi測序技術(shù)通過高精度長讀長解決了二代短讀長無法突破的重復(fù)區(qū)域和大型結(jié)構(gòu)變異的檢測以及復(fù)雜區(qū)域的組裝，還可同步進(jìn)行表觀遺傳分析，顯著推動了基因組學(xué)在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)、功能基因組學(xué)和進(jìn)化生物學(xué)等領(lǐng)域的突破性進(jìn)展，是解析生命復(fù)雜性的重要基石。

                              

 
HiFi 測序性能優(yōu)勢

01.長讀長
Long reads

HiFi測序提供15,000-20,000個堿基對或更長的讀長，使研究者能夠更容易地組裝完整的基因組和測序全長RNA轉(zhuǎn)錄本。

02.單分子分辨率的高準(zhǔn)確性
Single-molecule resolution high accuracy

由于PacBio的非系統(tǒng)誤差特性，HiFi測序的單分子準(zhǔn)確率可達(dá)99.9%（Q30）。
 
03.均一的基因組覆蓋率
Uniform genome coverage   

通過消除PCR擴(kuò)增偏好性，HiFi測序使研究者能夠分析其他技術(shù)通常難以獲取的基因組區(qū)域（如難以測序的GC富集區(qū)域、高度重復(fù)區(qū)域、長同源聚合物和回文序列）。

04.表觀遺傳同步檢測
Simultaneous epigenetic detection

可以直接通過酶動力學(xué)分析在測序過程中同時檢測DNA堿基修飾來提供表觀基因組數(shù)據(jù)而不需要任何額外的復(fù)雜樣品制備步驟，支持CpG的5mC檢測和Fiber-seq應(yīng)用的6mA檢測。

 
HiFi 測序技術(shù)原理流程

                            

 
HiFi 測序是由 PacBio公司開發(fā)的一種單分子、長讀長度的測序技術(shù)，HiFi 測序開始時，懸浮在溶液中的樣品DNA文庫片段涌入被稱為SMRT（Single Molecule Real-Time，單分子實時）芯片的納米微流控芯片表面。這種芯片的表面上覆蓋著幾百萬個納米級直徑的小孔，稱為ZMW（Zero-Mode Waveguide，零模波導(dǎo)孔），樣品流過SMRT測序芯片時，DNA文庫被固定在ZMW孔的底部，之后加入游離核苷酸，附著在樣品DNA上的DNA聚合酶開始復(fù)制DNA分子，當(dāng)聚合酶將新的核苷酸堿基聚合到新復(fù)制的鏈中時，會釋放出微小的光，被光學(xué)檢測系統(tǒng)捕獲。根據(jù)發(fā)射的光，測序系統(tǒng)可以確定哪種DNA堿基被合成了。

                          

 
HiFi測序中的DNA聚合酶環(huán)繞樣品DNA分子工作多次，在ZMW孔中產(chǎn)生了DNA分子的多個副本，因此PacBio長讀長測序系統(tǒng)可以通過交叉參照每個分子的副本來準(zhǔn)確確定樣品DNA的正確序列，從而最大程度地提高準(zhǔn)確性，這種模式稱為CCS測序（Circular Consensus Sequencing，循環(huán)一致性）模式，最終產(chǎn)生高質(zhì)量的HiFi reads。
 

HiFi 測序應(yīng)用
 
 

 
Vega桌面式測序儀

 
近日推出的PacBio首款桌面式長讀長測序平臺Vega 采用 HiFi 技術(shù)，提供出色的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和快速的運行時間，將 PacBio的高通量長讀長測序儀Revio系統(tǒng)的創(chuàng)新技術(shù)，以臺式解決方案重新呈現(xiàn)，與HiFi文庫制備流程和SMRT Link運行管理軟件無縫集成，每次運行均可在儀器上進(jìn)行初級分析，包括DeepConsensus、甲基化檢測和barcode拆分。
 

兩種試劑耗材，輕松使用

                  

 
Vega SMRT Cell 是 HiFi測序的核心，由半導(dǎo)體元件驅(qū)動，能夠提供單分子實時測序。Vega測序板承載上機(jī)所需樣品和試劑。一鍵式運行設(shè)置將Vega測序板與SMRT Link運行設(shè)計連接起來，直觀的設(shè)計和觸覺確認(rèn)降低了錯誤率并簡化了獲取結(jié)果所需的步驟。

 
Vega應(yīng)用樣本通量 
 

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